[發明專利]一種過表達TRAF6的DC細胞、DC細胞疫苗及構建方法和應用

有效

• 申請號: 202011332684.7
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112458058B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 臺桂香;王晶晶
• 申請（專利權）人: 康九生物科技（長春）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/52;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發明提供了一種過表達TRAF6的DC細胞、DC細胞疫苗及構建方法和應用，屬于DC疫苗技術領域。本發明成功構建了過表達TRAF6的DC細胞。本發明的過表達TRAF6的DC細胞更容易成熟，能夠更好地提呈抗原，激發更強的抗原特異性的T細胞免疫應答，能夠增強CD4supgt;+/supgt;T細胞的增殖和誘導Th1型免疫應答，能夠影響TRAF6信號通路下游的分子表達；所述過表達TRAF6的DC細胞能夠負載腫瘤抗原，得到DC細胞疫苗，本發明的DC細胞疫苗，具有更好的腫瘤殺傷活性，能夠顯著提高腫瘤抑制率，能夠增強抗腫瘤免疫應答，從而用于腺癌、肝癌、血液腫瘤等預防或治療的用途，為廣大癌癥患者帶來福音。

技術領域

本發明涉及DC疫苗技術領域，尤其涉及一種過表達TRAF6的DC細胞、DC細胞疫苗及構建方法和應用。

背景技術

DC細胞是重要的抗原提呈細胞，能攝取、加工抗原，向T淋巴細胞提呈抗原，啟動患者自身特異性抗腫瘤免疫反應。

目前，已經開發了多種DC細胞免疫療法，基于負載一種或多種特定腫瘤抗原的DC細胞疫苗已經在許多臨床研究中證明是可行和安全的。神經膠質瘤相關肽脈沖后的DC細胞，可以提高神經膠質瘤模型大鼠的存活率，并且可以誘導特異性抗腫瘤免疫應答并增強CD4⁺和CD8⁺T淋巴細胞的浸潤。使用離體負載肽的自體DC細胞(Sipuleucel-T)首次獲FDA批準，用于抵抗前列腺癌。由于DC細胞的抗原交叉呈遞及遷移至淋巴結的能力有限，DC療法的改進對于成功的癌癥免疫療法至關重要。

腫瘤壞死因子(TNF)受體相關因子6(TRAF6)是一種E3泛素連接酶，是IL-1R/TLR家族和TNFR超家族共有的信號轉導分子，在調節先天和適應性免疫，胚胎發育，組織穩態和骨代謝中起著不可或缺的作用。TRAF6介導的信號轉導對于DC細胞的發育，體內平衡和激活至關重要。TLR配體或CD40L在體外誘導野生型DC細胞上的表面分子(如MHC?II類和B7.2)上調，在TRAF6缺陷型DC細胞中上調嚴重受損。同樣，在野生型小鼠中，施用LPS或抗CD40抗體可以誘導DC細胞成熟，但在TRAF6基因敲除小鼠中則不會誘導DC細胞成熟。這些結果表明，TRAF6是體外和體內響應微生物成分(例如LPS或CD40L)的DC細胞成熟所必需的。此外，被各種TLR配體或CD40L激活的野生型DC細胞產生了大量的炎癥細胞因子，例如IL-6和IL-12，但是TRAF6基因敲除小鼠產生的DC細胞卻顯示出嚴重的細胞因子產生缺陷。同樣地，用LPS處理的野生型脾臟DC細胞刺激T細胞產生的IFN-γ顯著增加。相反，用LPS處理或未處理的TRAF6敲除的脾臟DC細胞刺激T細胞分泌少量的IFN-γ。同樣，對8周以上的TRAF6缺陷DC細胞的小鼠和同窩對照小鼠的小腸固有層基因表達進行分析后發現，Th1細胞相關因子IL-12和IFN-γ明顯降低，而Th2細胞相關因子IL-13，IL-5和IL-4顯著增加。肺部與腸道類似，與對照肺相比，TRAF6缺陷的DC細胞會導致肺中Th2相關免疫反應的自發產生，Th1相關細胞因子IL-12β的相對mRNA水平降低，而促纖維化因子Igf-1和Th2相關細胞因子IL-13和IL-5的mRNA水平升高。因此，TRAF6對于DC細胞的成熟和功能有重要的作用。現有技術中缺少一種能夠過表達TRAF6的DC細胞及其應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種過表達TRAF6的DC細胞、DC細胞疫苗及構建方法和應用，本發明的方法能夠實現TRAF6在DC細胞中成功過表達，并且過表達TRAF6的DC細胞更容易成熟，具有更高的誘導T細胞向Th1型極化的能力。此外，過表達TRAF6的DC細胞負載腫瘤抗原得到的DC細胞疫苗能夠用于腫瘤的防治。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種過表達TRAF6的DC細胞，所述DC細胞經重組慢病毒載體轉染得到；所述重組慢病毒載體中插入有TRAF6基因；所述TRAF6基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

優選的，所述重組慢病毒載體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。