[發明專利]一種壇紫菜谷草轉氨酶基因及其應用

有效

• 申請號: 202011332440.9
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112322643B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 段德麟;李爽;邵展茹;姚建亭
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/70;C12P13/20
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

本發明屬于分子生物學技術領域，具體的說是一種壇紫菜谷草轉氨酶基因及其應用。谷草轉氨酶(GOT)基因為序列表SEQ ID No.1中的堿基所示。本發明基于壇紫菜轉錄組測序結果，從壇紫菜中克隆得到一種轉錄水平較高的谷草轉氨酶(GOT)基因的cDNA序列，其開放閱讀框(ORF)為1290bp，編碼含429個氨基酸的蛋白質序列。利用體外原核表達體系，成功獲得可溶性重組蛋白表達。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體的說是一種壇紫菜谷草轉氨酶基因及其應用。

背景技術

谷氨酸和天冬氨酸是壇紫菜中重要的呈味氨基酸，谷草轉氨酶(GOT)是兩者合成代謝途徑中的關鍵酶，它存在于幾乎所有真核生物體內，是生物體內眾多轉氨酶中很重要的一個，可催化L-谷氨酸(Glu)和草酰乙酸(OAA)生成酮戊二酸(KG)和L-天冬氨酸(ASP)，在三羧酸循環和糖異生代謝中起著重要的作用，是生物體內氨基酸的生物合成和降解的重要中間介質；除此之外，谷草轉氨酶還參與了體內VB6的代謝過程，并且對植物體的固氮作用有一定影響。

在體外，谷草轉氨酶能夠以酸性氨基酸為氨基供體,T-酮酸為氨基受體,專一性地制備一系列芳香族氨基酸，可用于芳香族氨基酸的生產。

但目前對植物體內的谷草轉氨酶的活性研究較少，通過體外表達系統可對壇紫菜中的谷草轉氨酶的催化活性進行進一步的研究。

發明內容

本發明目的在于提供一種壇紫菜谷草轉氨酶基因及其應用。

為實現上述目的，本發明采用技術方案為：

一種壇紫菜谷草轉氨酶基因，谷草轉氨酶(GOT)基因為序列表SEQ IDNo.1中的堿基所示。

所述基因所編碼的蛋白為序列表SEQ ID No.2中氨基酸所示。

一種壇紫菜谷草轉氨酶基因，所述基因所編碼的蛋白在合成天冬氨酸中的應用。

一種壇紫菜谷氨酸合成酶基因的重組質粒，所述重組質粒含所述的谷草轉氨酶(GOT)基因所編碼的蛋白。

一種壇紫菜谷草轉氨酶基因的重組質粒的應用，所述質粒在合成天冬氨酸中的應用。

本發明的突出優點如下：

本發明從壇紫菜中克隆獲得谷草轉氨酶基因，并通過體外原核表達技術獲得該基因開放閱讀框(ORF)全長序列，對其編碼蛋白質的特征進行在線預測分析；通過低溫誘導表達，得到GOT蛋白，通過SDS-PAGE及Western blot檢測目的蛋白的可溶性。

本發明所得壇紫菜GOT蛋白可在原核表達系統中得到可溶性表達；且序列中經檢測發現含有Aminotran_1_2結構域，屬于轉氨酶家族。

附圖說明

圖1為本發明是實例提供的GOT基因克隆電泳圖與western blot結果圖；其中，a.GOT基因擴增；b.western blot檢測結果。

具體實施方式

以下結合實例對本發明的具體實施方式做進一步說明，應當指出的是，此處所描述的具體實施方式只是為了說明和解釋本發明，并不局限于本發明。

本發明基于壇紫菜轉錄組測序結果，從壇紫菜中克隆得到一種轉錄水平較高的谷草轉氨酶(GOT)基因的cDNA序列，其開放閱讀框(ORF)為1290bp，編碼含429個氨基酸的蛋白質序列。利用體外原核表達體系，成功獲得可溶性重組蛋白表達。

實施例1

本發明所述壇紫菜GOT基因的克隆方法，主要包括以下步驟：

1.壇紫菜葉狀體總RNA提取及cDNA合成；

2.GOT基因特異性引物合成及PCR擴增產物測序；