[發明專利]一種檢測ADGRG6高頻突變位點的方法及試劑盒有效
| 申請號： | 202011330770.4 | 申請日： | 2020-11-24 |
| 公開（公告）號： | CN112322739B | 公開（公告）日： | 2023-08-15 |
| 發明（設計）人： | 吳松;歐銅;徐銀燕 | 申請（專利權）人： | 深圳市羅湖區人民醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268 | 代理人： | 徐凱凱;王永文 |
| 地址： | 518001 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 adgrg6 高頻 突變 方法 試劑盒 | ||
1.一種檢測
所述引物C??T-R的序列如SEQ?ID.4所示，所述引物C??T-F的序列如SEQ?ID.5所示；所述探針C??T-PR的序列為5’?6FAM-CTACTG/iXNA_G/CTAGAGT/iXNA_C/CATG/iXNA_T/GAAA/iXNA_T/ATG-BHQ-1?3’，其中/iXNA_T/、/iXNA_C/及/iXNA_G/表示鎖核苷酸修飾，所述iXNA為LNA；所述內參引物Control-F的序列如SEQ?ID.7所示，所述內參引物Control-R的序列如SEQ?ID.8所示；所述探針Control-PR的序列為5’?6HEX-TGTACCTTGGATTCACTGGCCTGTC-BHQ-1?3’；
所述試劑盒用于檢測
采用所述試劑盒對待測樣品進行PCR擴增，得到擴增后樣品；
測量擴增后樣品的ΔCt值=?Ct值FAM?-Ct值HEX；
若chr.?6:?142,706,206?G??A突變位點體系擴增后樣品的ΔCt值14，則判定待測樣品為chr.?6:?142,706,206?G??A突變位點突變型，若擴增后樣品的ΔCt值14，則判定待測樣品為chr.?6:?142,706,206?G??A突變位點野生型；
若chr.?6:142,706,209?C??T突變位點體系擴增后樣品的ΔCt值14，則判定待測樣品為chr.?6:142,706,209?C??T突變位點突變型，若擴增后樣品的ΔCt值14，則判定待測樣品為chr.?6:142,706,209?C??T突變位點野生型；
所述試劑盒的反應體系包括反應體系1和反應體系2，
所述反應體系1包括：
10×PCR緩沖液?5μl，
MgCl2?40mM?4μl，
dNTP?2.5mM?2.5μl，
引物GA-F?10pM?2.5μl，
引物GA-R?10pM?2.5μl，
探針GA-PR?10pM?0.5μl，
Control-F?10pM?0.2μl，
Control-R?10pM?0.2μl，
Control-PR?10pM?0.5μl，
HSTaq酶?0.2μl，
DNA模板?5μl，
添加無菌雙蒸水至反應體系體積為50μl；
所述反應體系2包括：
10×PCR緩沖液?5μl，
MgCl2?40mM?4μl，
dNTP?2.5mM?2.5μl，
引物CT-F?10pM?2.5μl，
引物CT-R?10pM?2.5μl，
探針CT-PF?10pM?0.5μl，
Control-F?10pM?0.2μl，
Control-R?10pM?0.2μl，
Control-PR?10pM?0.5μl，
HSTaq酶?0.2μl，
DNA模板?5μl，
添加無菌雙蒸水至反應體系體積為?50μl。
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