[發明專利]用于檢測S.suis 2感染的合成肽Sao355~372

有效

• 申請號: 202011329160.2
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN112521458B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 王晶;潘秀珍;高基民;張會芳;鄒萍;李娜
• 申請（專利權）人: 無錫市婦幼保健院
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明公開了用于檢測S.suis 2感染的合成肽Sao_355～372及其應用。一種用于檢測S.suis 2感染的合成肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述的合成肽作為包被抗原在制備S.suis 2感染快速輔助診斷試劑盒中應用。本發明提供了一種自行設計的合成肽，通過實驗證實，該合成肽能夠捕捉到S.suis 2感染后人體外周血中的特異性抗體，可以作為包被抗原應用在S.suis 2感染快速輔助診斷試劑盒中。本發明為S.suis 2的快速輔助診斷提供了新思路，可以降低由于S.suis 2感染診斷不及時造成的死亡，具備潛在的良好臨床應用價值。

分案說明

本申請是申請號為2019113709019,發明名稱為”用于檢測S.suis 2感染的合成肽及其應用”的分案申請.

技術領域

本發明屬于醫學檢測領域，涉及用于檢測S.suis 2感染的合成肽Sao_355～372及其應用。

背景技術

2型豬鏈球菌(Streptococcus suis serotype 2，S.suis 2)屬球菌科、鏈球菌屬(Streptococci)，革蘭陽性兼性厭氧菌，是一種重要的人獸共患傳染病病原菌。S.suis 2不僅能夠感染豬導致急性敗血癥、腦膜炎、心內膜炎和急性死亡，而且可以通過呼吸道和傷口等傳播途徑，導致人的感染發病和死亡。本病呈全球性分布，對相關從業人員的健康構成嚴重威脅，已確定為重要的新發傳染病病原體。1998年和2005年分別在我國的江蘇省和四川省暴發了大規模S.suis 2感染疫情，患者中出現高比例的、國內外罕見的鏈球菌中毒性休克綜合征(Streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。患者病程極為兇險，可出現心臟、肝功能損壞、血細胞破壞及造血系統抑制、腦膜炎、聽神經損壞等多器官功能受損表現，多在發病1～3日內死亡^[1-2]。作為一種新現人獸共患傳染病病原，S.suis 2流行菌株表現出的高致病性和高病死率特征已經成為全世界關注的公共衛生的焦點^[2-4]，而盡早行相應抗感染治療可大大降低患者死亡率。迄今為止腦脊液和外周血培養仍然是判斷人感染S.suis2的金標準，但血培養易受抗凝劑、抗菌藥物、標本采集時間及培養方法等多因素影響，陽性率往往較低，所以建立可靠的檢測方法對S.suis 2感染的對癥治療尤為重要。因此，研究S.suis 2的蛋白結構，篩選特異性肽段并建立快速診斷S.suis 2感染的方法，對感染早期的應急處置具有重要臨床意義。

Sao蛋白(Surface antigen one)，是Li等在大規模搜尋與S.suis 2強致病性相關的功能蛋白的研究過程中發現蛋白^[5]。它通過C端LPVTG基序錨定在細胞壁表面，具有高度的保守性^[5]。免疫電鏡實驗證實Sao是一種廣泛分布于菌體表面的蛋白，并且Sao蛋白特異性抗體可以和S.suis 2的多種分離株發生特異性反應^[5]。表明Sao蛋白是在S.suis 2感染過程中表達的有效抗原。可見Sao蛋白具有成為S.suis 2感染篩選分子的巨大潛能。實驗室前期工作表明，重組Sao蛋白純化難度大，通過對Sao蛋白一級結構分析，Sao蛋白不穩定系數為42.24，高于閾值40，是不穩定蛋白。在實驗過程中遇到了類似易降解問題：蛋白純化過程中高濃度咪唑洗脫時仍出現蛋白雜帶，系重組Sao蛋白降解所致(圖1)。因此重組Sao蛋白保存時需加入4種蛋白酶抑制劑PMSF、Pepstantin、Leupeptin和Aprotinin，于4℃僅可穩定一周，-20℃僅可穩定6個月。這些因素阻礙了重組Sao蛋白作為檢測標志物的進一步開發。

目前已報道的關于Sao蛋白的免疫學信息分析較少，基于Sao蛋白免疫優勢表位的檢測標志物研究未見報道。若能篩選到S.suis 2感染特異表達的優勢表位，并研制相應的輔助診斷試劑盒，就能實現S.suis 2感染的快速輔助診斷，這將大幅度降低由于S.suis 2感染診斷不及時造成的死亡。

發明內容