[發明專利]一種檢測植物中轉基因事件的方法

在審

• 申請號: 202011328659.1
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN114544963A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 高鴻飛;吳剛;文璐珂;翟杉杉;崔丹丹;武玉花;閆曉紅;李俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58
• 代理公司: 北京嘉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11687
• 代理人: 楊超

1.一種檢測植物中轉基因事件的方法，所述方法包括用第一熒光染料標記第一靶標抗體，用第二熒光染料標記第二靶標抗體；通過樣品處理、石蠟包埋切片、石蠟切片脫蠟至水、抗原修復、屏蔽自發熒光處理、免疫熒光染色和鏡檢拍照后，根據觀察到的熒光顏色判斷待測樣品中的轉基因事件數量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一靶標事件和第二靶標事件是不同的靶標事件，優選的，第一靶標事件和第二靶標事件分別是PAT/bar和CP4-EPSPS靶標抗體。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一熒光染料和第二熒光染料是不同的熒光染料，優選的第一熒光染料和第二熒光染料分別是FITC和Cy3。

4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述方法還包括用第三熒光染料標記第三靶標抗體，用來檢測0-3種轉基因事件，所述第三靶標抗體是與第一靶標抗體和第二靶標抗體不同的靶標抗體，所述第三熒光染料是與第一熒光染料和第二熒光染料不同的熒光染料。

5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述樣品處理是取植物的任意部分烘干并研磨成粉末后，用3％瓊脂，投入FAA固定液中固定，優選的植物的任意部分是指種子，更優選的是油菜的種子。

6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述石蠟包埋切片是將切好的組織于脫水機內依次梯度酒精進行脫水和浸蠟，待蠟凝固冷卻后，切片，烤片，常溫保存備用。

7.根據權利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述石蠟切片脫蠟至水是將切片依次進行二甲苯、無水乙醇、酒精、蒸餾水處理。

8.根據權利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述抗原修復是將組織切片置于EDTA抗原修復緩沖液和PBS中處理，優選的，緩沖液和操作條件可以根據樣品的種類進行調整。

9.根據權利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述屏蔽自發熒光處理是指用依次加入自發熒光淬滅劑A和自發熒光淬滅劑B，最后進行血清封閉；

所述自發熒光淬滅劑A是為pH7.4的磷酸緩沖液與硼氫化鈉的混合液；

所述自發熒光淬滅劑B是蘇丹黑B與乙醇的混合液。

10.根據權利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，所述免疫染色是指將玻片脫色后，用熒光染料標記的轉基因靶標抗體標記靶標，脫色后進行封片。