[發明專利]用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物及檢測方法

在審

• 申請號: 202011322618.1
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112280873A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 賈曉旭;高玉時;陸俊賢;付勝勇;唐修君;樊艷鳳;馬尹鵬;張靜;顧榮;葛慶聯;姬改革;黃勝海;王玨;張丹
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京首捷專利代理有限公司 11873
• 代理人: 梁婧宇

本發明公開了用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物及檢測方法，屬于分子遺傳學技術領域。本發明用微衛星熒光標記方法解決了鴿線粒體由于序列復雜，用常規測序的方法無法準確測序的難題；本發明將線粒體標記和微衛星標記有機結合在一起，不受父系來源的影響，一對引物便可追溯母性祖先；本發明開發的分子標記多態性好、等位基因數目多，親緣分析數據準確，可以用于鴿的遺傳多樣性評價和系譜驗證，為鴿品種的開發利用提供遺傳學依據。

技術領域

本發明涉及分子遺傳學技術領域，更具體的說是涉及用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物及檢測方法。

背景技術

隨著居民生活水平的提高，人們對高品質和安全的食品需求量越來越大。鴿肉蛋白含量高，脂肪含量低，安全性好，是人類理想的健康食品，民間素有“一鴿勝九雞”的說法。據不完全統計，目前全國種鴿存欄達6000多萬對，年產乳鴿總量達到7億多只，生產總量已占到世界總量的80％以上。

盡管鴿養殖業經濟效益很好，但其種質資源研究工作仍較為薄弱，生產繁育體系極不健全，大都是自繁自育，品種性能退化嚴重。開展鴿群體遺傳結構分析和系譜鑒定工作，對于鴿優良品種資源保護和新品種培育具有重要的應用價值。

目前評價畜禽遺傳多樣性的方法應用較多的為微衛星和線粒體標記，微衛星標記具有高度的多態性、廣泛而又隨機地分布于整個基因組以及共顯性遺傳等優點，線粒體標記具有結構簡單、缺乏重組、進化快速和嚴格的母系遺傳等特點。迄今，未見在鴿線粒體的微衛星分子標記并應用的報道。

因此，提供用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物及檢測方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物及檢測方法，該分子標記為鴿種質資源評價、遺傳多樣性分析和系譜驗證提供工具。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星標記引物，所述微衛星標記引物序列如下：

正向引物：5’-TTTCCTATGATTACCACTGG-3’；SEQ ID NO.1；

反向引物：5’-TGTAAGCTACGGGGACG-3’；SEQ ID NO.2。

進一步，用于鴿遺傳多樣性分析的線粒體微衛星檢測方法，具體步驟如下：

(1)提取待測鴿樣品的基因組DNA；

(2)以步驟(1)提取的DNA為模板，合成上述引物對，并在正向引物5’端用FAM熒光染料標記，進行PCR擴增反應；

PCR反應體系為：2×PCRMix 25μL，10μmol/L正反向引物各1μL，50-100μg/ml模板DNA 2μL，超純水21μL；

PCR反應程序為：95℃5min；95℃30s，59℃30s，72℃60s，35個循環；72℃10min；

(3)PCR產物進行瓊脂糖電泳，或者在ABI 3730分析儀進行基因型判定。

進一步，步驟(1)所述樣品為鴿的羽毛或血液。

進一步，所述的線粒體微衛星標記引物在鴿種質資源評價、遺傳多樣性分析和系譜驗證中的應用。