[發明專利]基于HRP擴增用于檢測肺癌標志物CYFRA21-1光電免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 202011318138.8
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112326755B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 魏琴;冷東全;王歡;任祥;范大偉;劉蕾;鞠熀先
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/36;G01N33/574;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

本發明涉及基于HRP擴增用于檢測肺癌標志物CYFRA21?1超靈敏光電化學免疫分析傳感器的制備方法。本發明以BiVO₄/Ag₃VO4/SnS₂作為基底材料并用可見光照射來獲得光電流，三個基底組合形成異質結使得光電效率極大提高。HRP?二氧化硅?CYFRA21?1二抗納米復合物具有較大的空間位阻，并進一步進行HRP擴增后將電極材料置于4?氯?1?萘酚中生成不溶性沉淀，使得電子供體的傳遞得到三重阻礙，極大地改變了光致電流的變化，導致不同濃度的抗原表現出不同光電流，從而實現了對CYFRA21?1抗原超寬范圍的檢測（100 ng/mL?0.05 pg/mL），其檢測限為0.01 pg/mL。

技術領域

本發明涉及基于HRP擴增用于檢測肺癌標志物CYFRA21-1超靈敏光電化學免疫分析傳感器的制備方法，具體是以BiVO₄/Ag₃VO4/SnS₂作為基底材料，以HRP - 二氧化硅復合物作為二抗標記物，制備一種檢測CYFRA21-1抗原的光電化學傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術領域。

背景技術

肺癌是當今社會最常見的惡性腫瘤之一，致死率高，是危害人們生命的主要疾病之一。2011年我國肺癌新發病例約65萬，居男性惡性腫瘤發病第1位，女性第2位，僅次于乳腺癌%5B1%5D。目前，惡性腫瘤中患者死亡率居第1位的仍為肺癌，每年因肺癌死去的人數為52萬，在男性和女性人群中均居第1位%5B1%5D。%20肺癌的病理類型和腫瘤分期對其治療方案和5年生存率起著至關重要的作用，早診斷和早治療可以明顯提高患者預后及5年生存率，同時還能提高患者生存質量。采用生化手段檢測人體體液中的腫瘤標志物，對腫瘤的早期診斷有一定優勢。CYFRA21-1是細胞角蛋白19片段，由細胞結構中細胞角蛋白19的2個單克隆抗體組成，是篩查肺癌敏感度最高的腫瘤標志物之一，已廣泛用于肺癌的診斷、病理分型和治療評價。因此，構建一種快速、靈敏的檢測CYFRA21-1的分析方法十分重要。目前已有的CYFRA21-1得檢測方法有很多，如酶聯免疫分析、熒光分析、電化學發光分析等等。但酶聯免疫分析操作復雜繁瑣；熒光分析可控性差，毒性大；化學發光免疫分析檢測時間長。本發明設計了一種夾心型光電化學傳感器，夾心型傳感器檢測靈敏，準確度高，穩定性好，本發明設計的夾心型光電化學傳感器檢測簡單快速，穩定無毒，對CYFRA21-1的檢測限達到0.01pg/mL。

發明內容

本發明的目的之一是制備了BiVO₄/Ag₃VO4/SnS₂復合異質結材料，具有較好的光電響應，在可見光下具有很高的光電轉換效率。

本發明的目的之二是以HRP-SiO₂作為二抗標記物，同時制備HRP-酪胺復合物使得HRP擴增，在HRP的存在下可以將4-CN轉換為4-CD不溶性沉淀，因此在光電基底材料的表面附在了大量的阻礙電子供體轉移的物質使得光電流極大改變。

本發明的目的之三是以BiVO₄/Ag₃VO4/SnS₂作為基底，以HRP-SiO₂復合物作為二抗標記物，制備了一種靈敏度高、選擇性好、檢測速度快的光電化學傳感器，實現了在可見光下對癌癥標志物CYFRA21-1的靈敏檢測。

本發明的技術方案如下：

1. 基于HRP擴增用于檢測肺癌標志物CYFRA21-1超靈敏光電化學免疫分析傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）釩酸鉍的制備

取0.06 ~ 0.15 g五水合硝酸鉍和0.046 ~ 0.06 g正釩酸鈉溶解于40 ~ 60 mL水中，超聲20 ~ 50 min之后混合溶液轉入反應釜中，于160~ 180 °C下反應8 ~ 12 h，反應冷卻至室溫后，用無水乙醇和超純水各洗滌3次，真空干燥獲得產品粉末；