[發(fā)明專利]一種負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011317082.4
• 申請(qǐng)日: 2020-11-23
• 公開（公告）號(hào): CN112315965A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倪溫慨;趙絮影;卞賽燕;肖明兵;鄭文杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K31/58
• 分類號(hào): A61K31/58;A61K31/352;A61K9/70;A61K47/34;A61K47/36;A61K47/42;A61P17/02;A61P29/00
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

1.一種負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1.1、利用溶劑乳化揮發(fā)法制備包裹曲安奈德藥物的PLGA微球；

1.2、將步驟1.1制備的包裹曲安奈德藥物的PLGA微球溶于0.2M的醋酸殼聚糖/膠原/京尼平溶液，通過冷凍干燥法制備負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法，其特征在于，步驟1.1中明確包裹曲安奈德藥物的PLGA微球的緩釋性能的步驟為：

1.1.1、通過高效液相色譜測(cè)定載藥微球的載藥率、包封率；

1.1.2、在體外生理食管PH環(huán)境下藥物的釋放曲線。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法，其特征在于，步驟1.2中明確負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的持續(xù)給藥能力的步驟為：

1.2.1、光/電鏡觀測(cè)復(fù)合貼膜表面結(jié)構(gòu)；

1.2.2、HPLC測(cè)定生理食管PH環(huán)境下復(fù)合貼膜的藥物的釋放曲線。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法，其特征在于，步驟1.1中，制備包裹曲安奈德藥物的PLGA微球的具體步驟為：

1.1-1、采用水包油包固體乳化揮發(fā)法制備載藥微球；

1.1-2、將30mg曲安奈德粉末和270mg PLGA共溶于500μl二氯甲烷中，高速剪切乳化機(jī)10000rpm均質(zhì)1.5分鐘，形成S/O溶液；

1.1-3、將此S/O溶液緩慢注入5%的PVA 水溶液中，中等速度的旋渦持續(xù)2分鐘；

1.1-4、最后將形成的s/o/w乳液迅速轉(zhuǎn)移到0.5% PVA溶液中，磁力攪拌器低速攪拌3h以充分揮發(fā)過量的二氯甲烷；

1.1-5、制備完成的載藥微球經(jīng)2500rpm低速離心沉淀，純化水重懸洗滌兩次，最后經(jīng)過冷凍干燥，制得包裹曲安奈德藥物的PLGA微球，-20℃保存，備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的制備方法，其特征在于，步驟1.2中，制備負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的具體步驟為：

1.2-1、將0.5%的殼聚糖和0.5%的牛跟腱提取去端肽I型膠原蛋白混合溶解于0.2M醋酸中，并加入0.1%的京尼平，予磁力攪拌器混勻；

1.2-2、在步驟1.2-1的復(fù)合溶液中另行加入制備完成的包裹曲安奈德藥物的PLGA微球，于20℃下交聯(lián)24h，-20℃預(yù)冷凍24h，然后冷凍干燥24h；

1.2-3、用0.1M Na₂HPO₄中和多余醋酸，蒸餾水清洗，再次冷凍干燥，制得負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜。

6.一種負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的用途，其特征在于，用于預(yù)防食管ESD術(shù)后狹窄。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜的用途，其特征在于，包括如下驗(yàn)證步驟：

2.1、將負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜上種植不同來源的細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞活力，HE染色及掃描電鏡觀測(cè)細(xì)胞在負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜上的生長(zhǎng)情況，明確載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜在體外的生物相容性；

2.2、將負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜與TGFβ1活化的成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞活化指標(biāo)的變化，探究負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜對(duì)于成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響機(jī)制，從而在體外探討負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜對(duì)于纖維化狹窄的抑制作用；

2.3、在大鼠背部構(gòu)建皮膚缺損模型，并將負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜移植于創(chuàng)面，觀察原位疤痕的愈合收縮情況，免疫組化驗(yàn)證纖維化相關(guān)蛋白的變化，從而在體內(nèi)初步明確負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜對(duì)于纖維化疤痕收縮的影響；

2.4、構(gòu)建豬食管ESD狹窄模型，將負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜包裹于食管金屬支架，通過內(nèi)鏡在創(chuàng)面部位釋放，使負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜充分黏附創(chuàng)面表面，在不同時(shí)間點(diǎn)觀察狹窄形成情況，從而驗(yàn)證負(fù)載PLGA/曲安奈德微球的復(fù)合網(wǎng)狀貼膜對(duì)于預(yù)防食管ESD術(shù)后狹窄的影響。