[發明專利]一種覆盆子酮的工業化發酵生產方法

有效

• 申請號: 202011316680.X
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112391418B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 邢晨光;趙希景;苗楊利;洪英;劉偉
• 申請（專利權）人: 廈門歐米克生物科技有限公司
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12N1/20;C12N1/16;C12R1/04;C12R1/07;C12R1/85
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 李雁翔;姜謐

1.一種覆盆子酮的工業化發酵生產方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)以天然對香豆酸為原料，在放線菌Actinomycetes sp.OMK-74代謝下生成對羥基苯甲醛；

(2)以步驟(1)所得的對羥基苯甲醛與丙酮為原料，在芽胞桿菌Bacillus sp.OMK-75代謝下生成4-羥基芐叉丙酮；

(3)以步驟(2)所得的4-羥基芐叉丙酮為原料，在酵母菌Saccharomyces sp.OMK-76代謝下還原生成所述覆盆子酮；

放線菌Actinomycetes sp.OMK-74于2020年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO：M 2020584；芽胞桿菌Bacillus sp.OMK-75于2020年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO：M 2020585；酵母菌Saccharomycessp.OMK-76于2020年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO：M2020586。

2.如權利要求1所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述步驟(1)包括：

A、取甘油冷藏的放線菌Actinomycetes sp.OMK-74進行平板劃線，所得平板置于36-37℃培養至克隆子飽滿；

B、從上述克隆子中挑取單克隆子接種于第一種子培養基中，于36-37℃、180-220rpm搖床培養或280-320rpm通風攪拌培養20-25h，獲得第一種子培養液；

C、將上述第一種子培養液以8-12％的接種量接種于第一發酵培養基中，于36-37℃、pH＝7.0-7.5的條件下發酵培養12-16h至分光光度計測定OD₆₀₀不再增加時，一次性或分批流加對香豆酸至終濃度為48-52g/L，再繼續培養至底物反應完全或不再繼續反應時，然后經純化，獲得所述對羥基苯甲醛。

3.如權利要求2所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述第一種子培養基的配方如下表所示：

其中溶劑為水。

4.如權利要求2所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述第一發酵培養基的配方如下表所示：

其中溶劑為水。

5.如權利要求1所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述步驟(2)包括：

A、取甘油冷藏的芽胞桿菌Bacillus sp.OMK-75進行平板劃線，所得平板置于29-30℃培養至克隆子飽滿；

B、從上述克隆子中挑取單克隆子接種于第二種子培養基中，于29-30℃、180-220rpm搖床培養或380-420rpm通風攪拌培養20-25h，獲得第二種子培養液；

C、將上述第二種子培養液以8-12％的接種量接種于第二發酵培養基中，于34-35℃、pH＝6.5-7.0的條件下發酵培養8-12h至分光光度計測定OD₆₀₀不再增加時，一次性添加對羥基苯甲醛和丙酮分別至終濃度為38-42g/L和100-150g/L，再繼續培養至底物反應完全或不再繼續反應時，然后經純化，獲得所述對羥基芐叉丙酮。

6.如權利要求5所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述第二種子培養基的配方如下表所示：

其中溶劑為水。

7.如權利要求5所述的工業化發酵生產方法，其特征在于：所述第二發酵培養基的配方如下表所示：

其中溶劑為水。