[發(fā)明專(zhuān)利]一種香菇菌種提純復(fù)壯方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011311320.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112280730A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柴華;安道生;徐世渤;包婷婷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 清原田潤(rùn)華農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/38
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/38;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 沈陽(yáng)中科精創(chuàng)專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21253
• 代理人: 梁聰久

一種香菇菌種提純復(fù)壯方法,屬于食用菌菌種提純復(fù)壯技術(shù)領(lǐng)域，包括PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，尖端切割，轉(zhuǎn)接，第二培養(yǎng)基培養(yǎng)，尖端切割，轉(zhuǎn)接和第三培養(yǎng)基培養(yǎng)，子實(shí)體組織分離，并包括三種培養(yǎng)基的配方。該方法脫毒和提純同時(shí)進(jìn)行，周期短，效率高，培養(yǎng)基組分少，操作簡(jiǎn)單，提純復(fù)壯后，菌種活性強(qiáng)，抗逆性好，香菇產(chǎn)量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食用菌菌種選育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香菇菌種提純復(fù)壯方法。

背景技術(shù)

目前，我國(guó)80%的農(nóng)業(yè)區(qū)域進(jìn)行食用菌栽培，量大面廣，在農(nóng)村發(fā)展和農(nóng)民致富的過(guò)程中，起著關(guān)鍵性作用。然而，食用菌菌種在長(zhǎng)期保藏及轉(zhuǎn)代過(guò)程中普遍存在生產(chǎn)性能變劣、種性衰退等現(xiàn)象，例如香菇品種808、939、L26、L66等，這些優(yōu)良品種在長(zhǎng)期保藏及轉(zhuǎn)代培養(yǎng)過(guò)程中，菌種質(zhì)量逐漸退化，出現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)慢、抗逆性減弱、產(chǎn)量下降、菇質(zhì)變差等問(wèn)題，給食用菌生產(chǎn)帶來(lái)較大影響。

針對(duì)香菇菌種的退化問(wèn)題，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枮?01711008570.5的中國(guó)專(zhuān)利， 提出了一種食用菌菌種提純復(fù)壯方法，該方法包括以下步驟，（1）菌絲尖端三次轉(zhuǎn)接：取待提純復(fù)壯的退化的食用菌菌種放入第一培養(yǎng)基中，當(dāng)菌落的直徑達(dá)到2-3cm時(shí)，切割尖端移接置于第二培養(yǎng)基中，菌落再次的直徑達(dá)到2-3cm時(shí)，切割尖端移接置于第三培養(yǎng)基中，菌落再次的直徑達(dá)到2-3cm時(shí)，切割尖端移接置于第四培養(yǎng)基中；（2）抗生素培養(yǎng)：將步驟（1）中最后一次移接的菌種菌落的直徑達(dá)到2-3cm時(shí)，將菌種移至搖瓶培養(yǎng)液中，所述搖瓶培養(yǎng)液中加入青霉素，所述青霉素的加入量為200萬(wàn)單位/L，菌種在搖瓶培養(yǎng)液的液面表面培養(yǎng)直至液體表面長(zhǎng)滿菌絲體；（3）堿性木屑培養(yǎng)基培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)步驟（2）培養(yǎng)的菌種轉(zhuǎn)接至堿性木屑培養(yǎng)基培養(yǎng)直至長(zhǎng)出菌絲體，所述堿性木屑培養(yǎng)基中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的生石灰；所述堿性木屑培養(yǎng)基還包括以下重量份的組分,木屑60-70份，絲瓜絡(luò)5-8份，貝殼粉5-10份，蔗糖1-3份，麥麩25-35份，坡縷石粉3-5份。該方法提高了菌種的產(chǎn)量和質(zhì)量，但是，菌種提純復(fù)壯的步驟多，周期長(zhǎng)，效率低，因?yàn)槊看尉z尖端轉(zhuǎn)接都需要大約20天，三次轉(zhuǎn)接需要60天左右。其二，菌種在抗生素培養(yǎng)基中培養(yǎng)，加入的抗生素只能殺滅革蘭氏陽(yáng)性菌，對(duì)陰性菌無(wú)效，對(duì)霉菌和病毒起不到抑制和殺滅作用；第三堿性木屑培養(yǎng)基組分多，操作復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種香菇菌種提純復(fù)壯方法，克服上述專(zhuān)利方法工藝步驟多，周期長(zhǎng)，效率低的問(wèn)題、對(duì)霉菌和病毒起不到抑制和殺滅作用的問(wèn)題以及堿性木屑培養(yǎng)基組分多，操作復(fù)雜的問(wèn)題，提高香菇的產(chǎn)量和質(zhì)量。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明包括以下步驟：

（1）PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)：將需要提純復(fù)壯的菌種接入PDA培養(yǎng)基中，所述PDA培養(yǎng)基含有馬鈴薯200份，葡萄糖20份，瓊脂20份，利巴韋林10份，水1000份,將馬鈴薯粉碎，放入水中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，得到馬鈴薯的浸泡液，然后將葡萄糖，瓊脂，利巴韋林分別放入過(guò)濾所得到的馬鈴薯浸泡液中，攪拌均勻，制得PDA培養(yǎng)基；

（2）第二培養(yǎng)基培養(yǎng)：當(dāng)接入PDA培養(yǎng)基中的菌落直徑達(dá)到1-2cm時(shí)，切割尖端1-1.5mm移接于第二培養(yǎng)基中，所述第二培養(yǎng)基含有馬鈴薯200份，葡萄糖20份，瓊脂20份，雙黃連口服液20份，水1000份, 將馬鈴薯粉碎，放入水中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，得到馬鈴薯的浸泡液，然后將葡萄糖，瓊脂，雙黃連口服液分別放入過(guò)濾所得到的馬鈴薯浸泡液中，攪拌均勻，制得第二培養(yǎng)基；

（3）當(dāng)接入第二培養(yǎng)基中的菌落直徑達(dá)到1-2cm時(shí)，切割尖端1-1.5mm移接于第三培養(yǎng)基中，所述第三培養(yǎng)基含有木屑95份，麥麩4份，石膏1份，雙黃連口服液30份，水1000份, 將木屑，麥麩，石膏， 雙黃連口服液分別放入水中，攪拌均勻，制得第三培養(yǎng)基。

（4）將接入第三培養(yǎng)基中的菌落，在20℃-25℃培養(yǎng)，將培養(yǎng)出來(lái)的子實(shí)體進(jìn)行組織分離，實(shí)現(xiàn)香菇菌種的提純復(fù)壯。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了如下有益效果: