[發(fā)明專利]一種除草劑抗性基因表達(dá)載體及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011310327.0 | 申請(qǐng)日： | 2020-11-20 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112626111B | 公開（公告）日： | 2023-06-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張先文;梅磊;王東芳;項(xiàng)雅琴;胡衛(wèi)珍;沈志成 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/84 | 分類號(hào)： | C12N15/84;C12N15/29;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/46;A01H6/20;A01H6/54 |
| 代理公司： | 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201 | 代理人： | 黃美娟;李世玉 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 除草劑 抗性 基因 表達(dá) 載體 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述表達(dá)載體包含啟動(dòng)子、草甘膦抗性基因、草銨膦抗性基因和終止子；所述草甘膦抗性基因采用啟動(dòng)子pUbi，草銨膦抗性基因采用復(fù)合啟動(dòng)子；所述復(fù)合啟動(dòng)子由花椰菜病毒的35S啟動(dòng)子和水稻Actin基因中內(nèi)含子組成的復(fù)合啟動(dòng)子，記為復(fù)合啟動(dòng)子p35S-OsAct1?intron；
所述除草劑抗性基因表達(dá)載體的雙元載體表達(dá)框T-DNA的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1所示；
所述復(fù)合啟動(dòng)子p35S-OsAct1?intron的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1中4069?bp-5393bp所示；
所述草甘膦抗性基因5’端有信號(hào)肽，所述信號(hào)肽的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1中2288bp-2509?bp。
2.如權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述草甘膦抗性基因?yàn)閏p4基因，核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1中2510?bp?-3877?bp所示。
3.如權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述草銨膦抗性基因?yàn)閎ar基因，核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1中5401?bp?-5955?bp。
4.如權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述草甘膦抗性基因與草銨膦抗性基因的終止子核苷酸序列均為SEQ?ID?NO：1中3884?bp?-4068?bp所示。
5.如權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述除草劑抗性基因表達(dá)載體的骨架為載體?pCAMBIA-1300。
6.如權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體，其特征在于所述除草劑抗性基因表達(dá)載體按如下步驟構(gòu)建：用XhoI和KpnI對(duì)pCambia1300進(jìn)行雙酶切，回收獲得載體；用XhoI和NcoI酶切含有人工合成bar基因的質(zhì)粒，獲得bar片段；用NcoI和KpnI對(duì)含有人工合成的p35S-OsAct1?intron復(fù)合啟動(dòng)子的質(zhì)粒，回收得到p35S-OsAct1?intron片段；然后，將上述酶切后的載體和bar片段、p35S-OsAct1?intron片段進(jìn)行三段連接，獲得過渡載體1300-p35S-OsAct1?intron-bar；用HindII和KpnI分別對(duì)含有人工合成pUBi-CP4-ter質(zhì)粒和過渡載體1300-p35S-OsAct1?intron-bar進(jìn)行雙酶切后連接，獲得除草劑抗性基因表達(dá)載體1300-p35S-OsAct1?intron-bar-?pUBi-CP4。
7.一種權(quán)利要求1所述除草劑抗性基因表達(dá)載體在制備轉(zhuǎn)基因抗除草劑農(nóng)作物中的應(yīng)用，其特征在于所述農(nóng)作物包括玉米、水稻、大豆。
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