[發明專利]一種從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法

在審

• 申請號: 202011310307.3
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112375160A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 陳杰鵬;段麗麗;陳煜藩;陳鴻銳;胡留松;洪琳;黃曉瑩;葉紅林;紀燁瑜;蔡春麗
• 申請（專利權）人: 廣東雙駿生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 劉凱強;張奎燕

1.一種從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，包括以下步驟：

(1)對所述微生物發酵液調節pH值至酸性或中性并加入鹽，形成懸浮液；

(2)將懸浮液固液分離后，使用微濾膜、超濾膜和納濾膜進行濃縮，得到透明質酸濃縮液；

(3)將所述透明質酸濃縮液通過離子交換樹脂。

2.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述微生物選自馬疫鏈球菌、獸疫鏈球菌、谷氨酸棒桿菌、乳酸乳球菌和大腸桿菌中的任意一種或更多種。

3.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，步驟(2)所述固液分離為將所述懸浮液放入離心機中離心分離，獲取上清液，所述上清液使用微濾膜進行過濾，獲得濃縮液；

可選地，所述微濾膜為陶瓷膜；

可選地，所述離心分離的離心轉速為4000r/min至30000r/min；

可選地，所述微濾膜過濾后的濃縮液的電導率為1mS/cm至7mS/cm。

4.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，調節后的所述微生物發酵液的pH值為2至7，可選地，調節后的所述發酵液的pH值為3至5；

可選地，調節所述發酵液pH值使用的酸選自鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸和醋酸中的任意一種或更多種；

可選地，所述酸的濃度為0.1-6N，優選地，所述酸的濃度為0.5N。

5.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述鹽的加入量使得所述微生物發酵液的電導率為75mS/cm至350mS/cm；

可選地，所述鹽選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鋅、氯化鎂、碳酸氫鈉、硫酸鈉、硫酸鎂和葡萄糖酸鋅中的任意一種或更多種。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述微濾膜截留分子量在100000Da至1000000Da，超濾膜為截留分子量在5000Da至100000Da。

7.根據權利要求6所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述膜分級設置攔截不同分子量的所述透明質酸；

所述微濾膜包括截留分子量在1000000Da以上的微濾膜A、截留分子量在500000Da至1000000Da的微濾膜B、截留分子量在200000Da至500000Da的微濾膜C、截留分子量在100000Da至200000Da的微濾膜D；

所述超濾膜包括截留分子量在50000Da至100000Da的超濾膜A、截留分子量在10000Da至50000Da的超濾膜B、截留分子量在5000Da至20000Da的超濾膜C；

可選地，所述納濾膜截留分子量在300Da至5000Da；

可選地，所述微濾膜或超濾膜過濾后的濃縮液經過純水水洗至電導率為1mS/cm至7mS/cm。

8.根據權利要求1至5中任一項所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述離子交換樹脂包括陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂。

9.根據權利要求8所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，可選地，所述透明質酸濃縮液依次經過陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂；

可選地，所述陽離子交換樹脂選自D001大孔陽離子交換樹脂、D61大孔強陽離子交換樹脂、D62大孔強陽離子交換樹脂、D72大孔強陽離子交換樹脂、D113弱陽離子交換樹脂、D85弱陽離子交換樹脂中的任意一種或更多種；

可選地，所述陰離子交換樹脂選自D280強陰離子交換樹脂、D301大孔弱陰離子交換樹脂、D311大孔弱陰離子交換樹脂、D201大孔強陰離子交換脂中的任意一種或更多種。

10.根據權利要求9所述的從微生物發酵液中分離純化透明質酸的方法，其中，所述陽離子交換樹脂的洗脫液為純水，所述陰離子交換樹脂的洗脫液為pH值2-4的水。