[發明專利]一種緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202011309463.8
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112315980A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 趙遠錦;甘璟璟;王月桐;商珞然
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K33/38;A61K9/00;A61K47/36;A61K47/42;A61P17/02;A61P31/04;A61P3/10;A61M37/00
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 王楠

1.一種緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、配制生物可降解聚合物溶液：

稱取一定量的生物可降解聚合物，加入到雙蒸水中分散，充分溶解，形成生物可降解聚合物溶液；

S2、分離MSC干細胞來源的外泌體：

取充質干細胞培養液，收集細胞培養上清，采用離心法提取MSC來源外泌體；

S3、制備負載MSC來源外泌體的微針單元：

在S1中制備的生物可降解聚合物溶液中加入光引發劑，將S2中提取的MSC來源外泌體按一定密度均勻混合于上述加入光引發劑的生物可降解聚合物溶液中，形成混懸液；將所述混懸液加入到微針模板中，紫外光固化后制得負載MSC來源外泌體的微針單元；

S4、制備抗菌微針基板：

配制含金屬納米顆粒的高分子聚合物溶液，灌注到S3制備的微針模板表面，充分裝填后干燥，形成抗菌微針基板，最終將負載MSC來源外泌體的微針單元和抗菌微針基板從微針模板中剝離，獲得固態的目標產物緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針。

2.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S1中，所述生物可降解聚合物溶液為20~50%透明質酸鈉溶液或15~40%甲基丙烯酸酯明膠溶液。

3.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S2具體為：選取處于對數生長期的MSC用于外泌體的分離提取，采用MSC完全培養基進行培養，當細胞生長至80~85%融合度時，將MSC完全培養基更換為無血清的培養基，繼續培養36~72小時；收集細胞培養上清，采用超速離心法提取MSC來源外泌體；所述MSC為人臍帶間充質干細胞第2~4代；超速離心的條件為：50,000~65,000 rpm，4°C，1~2小時。

4.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S3中，所述MSC來源外泌體在生物可降解聚合物溶液中密度為10~50μg/ml。

5.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S4中，所述高分子聚合物選自絲素蛋白、硫酸軟骨素、羧甲基纖維素鈉、透明質酸鈉、聚乙二醇雙丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯明膠、海藻糖、羧甲基纖維素、透明質酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、半乳糖、糊精、麥芽糖、聚乳酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚二甲基硅氧烷中的一種或多種。

6.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S4中，所述金屬納米顆粒為金、銀、銅納米顆粒中的一種，粒徑為5~100 nm；金屬納米顆粒在高分子聚合物溶液中的濃度為1~10 mM。

7.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，S3中，利用施加壓力或抽真空的方法使混懸液加入到微針模具微孔中；其中，施加壓力為0.2~0.8 MPa，抽真空達到的真空度為0.02~0.1Mpa。

8.根據權利要求1所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針的制備方法，其特征在于，所述微針單元的形狀為金字塔形、圓錐形、子彈形、箭頭形或劍形；微針底部直徑為50~250 μm，高度為200~1000 μm；相鄰微針的間距為300~950μm。

9.一種緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針，其特征在于，包括抗菌微針基板及固定于抗菌微針基板上的負載MSC來源外泌體的微針單元。

10.權利要求1~9任意一項所述的緩釋MSC來源外泌體的抗菌損傷修復微針在組織損傷疾病修復治療中的應用。