[發(fā)明專利]一種內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌、應(yīng)用及其分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011302386.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN112391314B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張屹東;安莎;趙麗娜;楊森林;趙姝睿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;A01N63/22;A01P3/00;A01P21/00;A01G22/15;A01G13/00;C12R1/085
• 代理公司: 上海段和段律師事務(wù)所 31334
• 代理人: 李佳俊;郭國中

本發(fā)明公開了一種內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌、應(yīng)用及其分離方法，其中，分離方法包括如下步驟：步驟S1：從土壤中分離細(xì)菌菌株；步驟S2：將步驟S1中分離出的細(xì)菌菌株進(jìn)行篩選，得到所述需要的內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌。此外，本發(fā)明還涉及了一種內(nèi)生蠟狀芽孢桿菌的分離及其用作抗根腫病的生物防治劑的方法。該細(xì)菌菌株可以防御小白菜等植物被蕓薹根腫菌侵染。蠟狀芽孢桿菌作為生物防治劑也可用于增強(qiáng)植物生長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中，一種可以控制小白菜根腫病侵染并有效改善植物生長(zhǎng)的微生物接種劑。具體是指本發(fā)明從植物根際中分離出了新的蠟狀芽孢桿菌 MZ-12菌株，該菌株可以抑制蕓苔屬根腫菌的感染和提高植物生物量。

背景技術(shù)

根腫病是鞭毛菌亞門蕓薹根腫菌(Plasmodiophora Brassicae woron)侵染引起的 一種土傳真菌病害，嚴(yán)重危害十字花科植物根部，是世界范圍內(nèi)的毀滅性土傳植物 病害。由于根腫病具有傳染性強(qiáng)、傳播速度快、傳播途徑多、防治困難等特點(diǎn)，使 得該病在我國迅速蔓延，已造成十字花科作物生產(chǎn)在幾乎所有省份都受到了極大的 影響。小青菜(Brassica campestris sp.chinensis L.)十字花科蕓薹屬，又名小白菜， 因根腫病的蔓延，我國小青菜的生產(chǎn)受到了嚴(yán)重制約。

蕓薹根腫菌是嚴(yán)格的專性寄生菌，該病原體的生命周期復(fù)雜，大體可以分為兩 個(gè)階段：第一階段為根毛感染階段，病菌休眠孢子釋放出初級(jí)游動(dòng)孢子，游動(dòng)孢子 穿過細(xì)胞壁抵達(dá)根毛的表面；第二階段為孢子囊內(nèi)生成數(shù)個(gè)次生游動(dòng)孢子，穿透根 部的皮層組織并在皮質(zhì)組織內(nèi)細(xì)胞發(fā)育數(shù)周，導(dǎo)致根異常腫大。根瘤的形成阻礙了 水分和養(yǎng)分向上運(yùn)輸，地上部變得枯萎和發(fā)育遲緩，造成產(chǎn)量和品質(zhì)的下降。

目前，十字花科根腫病的防治主要通過拔除田間野生寄主、使用誘餌作物、輪 作及使用石灰、曝曬土壤、使用殺菌劑等處理方式減少病原菌的傳播及降低土壤中 病原菌含量來控制根腫病的發(fā)生，但都不能完全消除根腫病菌。抗性品種可能是一 個(gè)很好的選擇，但由于物種特異性，抗藥性可能會(huì)由于病原小種的改變而受到影響。 各種化學(xué)藥劑對(duì)根腫病的防治效果不一，并且農(nóng)藥的殘留量大、毒性大等原因而并 未在上海地區(qū)廣泛使用。

由于十字花科蔬菜根腫病病原菌具有很強(qiáng)的抗逆性，在土壤中存活時(shí)間長(zhǎng)。因此，采用土壤中的生防菌對(duì)其進(jìn)行防治成為根腫病防治新的思路。有益的內(nèi)生或根 際微生物的應(yīng)用是管理根部合理、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)的方法。已有大量文獻(xiàn)說明了植物相 關(guān)微生物的潛在應(yīng)用，這些微生物可以促進(jìn)植物生長(zhǎng)并管理土壤生態(tài)系統(tǒng)。例如枯 草芽孢桿菌(Bacillus subtilis QST713)對(duì)根腫病有較好的防效，可以達(dá)到60％以上。 灰紅鏈霉菌(Streptomyces griseorube)可以有效控制大白菜根腫病，在溫室條件下 防效可以達(dá)到72.8％，在大田條件下防效可以達(dá)到68.5％。Cheah等從室內(nèi)和田間試 驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1個(gè)鏈霉菌菌株(599)和3個(gè)木霉菌株(TC32，TC45，TC63)可有 效控制十字花科根腫病的發(fā)生。由于土壤微生物可以在根部或根際定殖，因此生物 防治根腫病是非常有效的策略。

從芥菜植物中分離出的蠟狀芽孢桿菌菌株能夠減少棉花幼苗中由茄狀枯萎病 引起的根腐病的發(fā)生。此外，蠟狀芽孢桿菌菌株BT8和BP24已被用于馬鈴薯、番 茄和山核桃等幾種作物的病害生物防治劑。在另一項(xiàng)研究中，從番茄植物中分離出 的蠟狀芽孢桿菌通過快速的根際定殖成功地控制了南方根結(jié)線蟲的發(fā)生，從而顯著 減少了病害的危害。

發(fā)明內(nèi)容

基于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提出了一種內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌、應(yīng)用及其分離方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌，所述內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.21141。

第二方面，本發(fā)明還提出了一種內(nèi)生蠟樣芽孢桿菌的分離方法，其包括如下步驟：

步驟S1：從土壤中分離細(xì)菌菌株；