[發明專利]一種氨基化磁性微球的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202011302103.5
• 申請日: 2020-11-19
• 公開（公告）號: CN112427027A
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 余浩
• 申請（專利權）人: 南京瑞貝西生物科技有限公司
• 主分類號: B01J20/28
• 分類號: B01J20/28;B01J20/22;B01J20/30;C12N15/10
• 代理公司: 上海浙晟知識產權代理事務所(普通合伙) 31345
• 代理人: 楊小雙

本發明公開了一種氨基化磁性微球的制備方法及應用，涉及脫氧核糖核酸(DNA)吸附材料技術領域，所述方法包括如下步驟：將預處理后的磁性納米顆粒與五乙烯六胺進行氨基化反應得到磁性復合微球；將磁性復合微球在堿性緩沖液中進行分散，并與五乙烯六胺在室溫下進行攪拌反應；將攪拌反應得到的產物在磁場作用下進行磁性分離得到固體產物；對固體產物進行去除雜質處理并干燥后得到氨基化磁性微球。通過本方法制得的氨基化磁性微球對DNA的吸附效果好，吸附效率高，可以在脫附后循環使用多次，環保經濟，節約了生產成本。

技術領域

本發明涉及脫氧核糖核酸(DNA)吸附材料技術領域，具體涉及一種氨基化磁性微球的制備及應用方法。

背景技術

從生物樣品中提取核酸是分子生物學和臨床醫學等生命科學研究領域中的一項基本技術。核酸提取的傳統方法如酚-氯仿抽提法，存在著有機溶劑毒性大、重復性勞動多、難以實現微型化、自動化操作等缺點。而近年來發展起來的以玻璃粉、離子交換樹脂、硅膠等為吸附材料的核酸固相萃取法，不僅可以避免使用毒性強的有機溶劑，而且能大幅度提高提取效率。基于固相萃取技術的核酸純化微芯片已經引起了人們的廣泛關注。磁性微粒作為一種新型的核酸固相萃取劑，借助于適當的磁分離裝置，可以進一步簡化和加速核酸的分離與純化過程，實現核酸純化處理的微型化、自動化和平行化。不過如何提高磁性微球與DNA特異性結合和及循環使用的能力，仍然需要被克服。

發明內容

本發明的目的在于提供一種氨基化磁性微球的制備方法及應用，以解決現有技術中的吸附材料吸附效率較低，不能重復使用的缺陷。

通過以下方面實現本發明的技術方案：

第一方面，提供了一種氨基化磁性微球的制備方法，所述方法包括如下步驟：

S1：將磁性納米顆粒進行預處理，預處理后的磁性納米顆粒與五乙烯六胺進行氨基化反應得到磁性復合微球；

S2：將步驟S1得到的磁性復合微球在堿性緩沖液中進行分散，并與五乙烯六胺在室溫下進行攪拌反應，得反應后的產物；

S3：將步驟S2攪拌反應得到的產物在磁場作用下進行磁性分離得到固體產物；

S4：對步驟S3得到的固體產物進行去除雜質處理，并干燥后得到氨基化磁性微球。

進一步的，所述步驟S1中磁性納米顆粒進行預處理的方法包括通過聚多巴胺對所述磁性納米顆粒進行包裹。

進一步的，所述步驟S1中，預處理后的磁性納米顆粒與五乙烯六胺的質量比為1：(1-5)。

進一步的，所述步驟S1中，磁性納米顆粒選自合金納米粒子、鐵氧體的納米粒子、金屬間化合物的納米粒子中的任意一種或多種。

進一步的，所述步驟S2中，攪拌反應的反應時間為6-10h。

進一步的，所述步驟S4中，對固體產物進行去除雜質處理的方法包括：

通過水和/或乙醇對固體產物進行至少六次清洗。

第二方面，提供了一種根據制備方法制得的氨基化磁性微球的應用方法，所述方法包括：

吸附反應：將氨基化磁性微球放置于含脫氧核糖核酸(DNA)中在特定環境下進行吸附，直至飽和；

脫附反應：將吸附飽和的氨基化磁性微球放置于堿性緩沖液中進行脫附操作；

將脫附反應后的氨基化磁性微球再次用于吸附反應。

進一步的，所述吸附反應和所述脫附反應，其反應時間均不少于60min。

進一步的，所述脫附反應是在磁場作用下進行脫附。