[發(fā)明專利]一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011301211.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN112505017B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧玉棟;周婷;佘秋鈿;游瑞云;馮尚源
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 福州科揚(yáng)專利事務(wù)所(普通合伙) 35001
• 代理人: 李曉芬

1.一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)改性Au@Au球形核殼結(jié)構(gòu)的制備：帶普魯士藍(lán)內(nèi)標(biāo)的Au@Au?NPs溶液活化后修飾上用于識(shí)別IL-6的IL-6抗體，得到改性Au@Au球形納米粒子；

2)捕獲IL-6的SERS二維基底的制備：將修飾有氨基的玻璃片沒入Ag?NPs膠體中，浸泡24h后取出，用超純水沖去多余Ag?NPs膠體，得到二維銀片基底；利用Ag-S鍵的連接將4-MPBA固載在銀膜上，再用乙醇沖去未修飾的4-MPBA，最后再用PBS沖洗，得到捕獲IL-6的SERS二維基底；

3)IL-6標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測(cè)：將不同濃度的IL-6標(biāo)準(zhǔn)溶液與二維SERS基底充分接觸1h，PBS溶液沖洗后，加入100μL?0.2％BSA溶液反應(yīng)20min；而后加入修飾有IL-6抗體的改性Au@Au球形核殼結(jié)構(gòu)共孵育1h后，用PBS溶液洗去未結(jié)合上目標(biāo)分子IL-6的SERS探針，自然干燥后進(jìn)行SERS檢測(cè)，建立工作曲線和進(jìn)行成像檢測(cè)；

4)血液樣品中IL-6的檢測(cè)：選用白血病患者的血液，離心除去大分子物質(zhì)；加入濃度為5-25μg/mL的IL-6旋轉(zhuǎn)30min達(dá)到完全混合，得到IL-6血液樣品溶液；檢測(cè)過程與步驟(3)中IL-6標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)步驟相同，測(cè)得血液樣品中IL-6拉曼光譜，帶入步驟(3)獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，求出血液樣品中IL-6濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法，其特征在于，步驟1)具體步驟如下：將2mL的Au@Au?NPs膠體加入等體積濃度分別為10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9M的SH-PEG-COOH溶液中，在核殼結(jié)構(gòu)表面修飾上-COOH；離心洗滌后得到Au@Au@COOH?NPs，活化-COOH以便于修飾抗體；活化好的Au@Au?NPs加入5ng/mL的IL-6抗體，反應(yīng)1h，4℃下孵育24h，離心洗滌后重分散在PBS溶液中，得到改性的Au@Au球形納米粒子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法，其特征在于，Au@Au?NPs核殼膠體溶液制備方法如下：將2mL的Au?NPs膠體中加入濃度為0.5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的水溶液，用于刻蝕Au?NPs納米顆粒表面；均速將濃度均為0.1mmol/L的0.2-2mL的K₄[Fe(CN)₆]和等量的FeCl₃·6H₂O同時(shí)滴入刻蝕好的Au?NPs膠體溶液中，生成普魯士藍(lán)；Au@PB納米粒子溶液離心洗滌后重新分散到超純水中，濃縮10倍體積后加入1％檸檬酸三鈉溶液反應(yīng)30min，加熱至沸，按10:1的體積比加入對(duì)應(yīng)量的1mmol/L?HAuCl₄溶液反應(yīng)1h，得到藍(lán)紫色Au@Au?NPs納米膠體，離心洗滌備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法，其特征在于，AuNPs膠體溶液制備方法如下：99mL水中加入1mL?1％質(zhì)量百分比的HAuCl₄溶液，加熱至沸后加入1mL?1％檸檬酸三鈉溶液，劇烈攪拌下繼續(xù)沸騰15min直至還原反應(yīng)完全，得到酒紅色Au?NPs納米膠體，離心洗滌備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于SERS技術(shù)檢測(cè)血液中IL-6的方法，其特征在于，活化-COOH的方法如下：在Au@Au@COOH?NPs中加入20μL,34mmol/L的EDC和17mmol/L的NHS溶液，反應(yīng)30min，離心后備用。