[發明專利]非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌的構建方法、該方法構建的重組菌及應用

有效

• 申請號: 202011299212.6
• 申請日: 2020-11-19
• 公開（公告）號: CN112410357B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 宋元達;孫彩麗;張懷淵;楊武;陳美玲
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/80;C12N9/10
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 高洋;肖太升

1.一種非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌的構建方法，其特征在于，將二酰甘油酰基轉移酶DGAT的核苷酸序列連接至整合型質粒pMAT2075，該重組質粒經電轉化至尿嘧啶缺陷型卷枝毛霉的原生質體中，篩選陽性克隆，使二酰甘油酰基轉移酶DGAT在尿嘧啶缺陷型卷枝毛霉中過表達，即獲得所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌；

所述二酰甘油?；D移酶DGAT的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根據權利要求1所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌的構建方法，其特征在于，所述尿嘧啶缺陷型卷枝毛霉為卷枝毛霉WJ11的尿嘧啶缺陷型。

3.一株采用權利要求2所述方法構建的非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌，其特征在于，所述高產脂卷枝毛霉重組菌為卷枝毛霉DGAT菌株，該菌株于2020年09月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC No.20730。

4.權利要求3所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌在發酵生產脂質中的應用。

5.一種利用權利要求3所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌發酵生產脂質的方法，其特征在于，將CGMCC No.20730菌株的種子培養液按照10％接種量接種于添加油脂作為碳源的發酵培養基上，發酵時，按照2mL/L加入消泡劑聚丙二醇2000；發酵條件為28℃，600rpm，進氣量1v/v min^-1，pH維持6.0。

6.根據權利要求5所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌發酵生產脂質的方法，其特征在于，所述1L發酵培養基的組成為：葡萄糖40g，油脂21.6g，MgSO₄·7H₂O 1.5，金屬母液100μL，酒石酸銨2g，KH₂PO₄ 7.0g，NaHPO₄ 2g，酵母膏1.5g，CaCl₂·2H₂O 0.1g，水余量；

所述金屬母液組成為：FeCl₃·6H₂O 8g，ZnSO₄·7H₂O 1g，CuSO₄·5H₂O 0.1g，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.1g，MnSO₄·5H₂O 0.1g，加蒸餾水配置成100mL。

7.根據權利要求5所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌發酵生產脂質的方法，其特征在于，所述油脂為大豆油。

8.根據權利要求5所述非從頭合成的高產脂卷枝毛霉重組菌發酵生產脂質的方法，其特征在于，所述油脂經乳化后添加，所述的乳化過程為：向油脂中添加重量分數1％的吐溫80，添加少量水，利用均質機在8000rpm的條件進行均質5min，然后超聲5min，再均質3min。