[發(fā)明專利]一種利用單烯醇酮醋酸酯制備布瑞諾龍的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011298901.5
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112501235B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊帆;蓋祎;戴龍華;湯杰;湯天天
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東師范大學(xué);上海格苓凱生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P33/06
• 分類號(hào): C12P33/06;C07J7/00
• 代理公司: 上海德禾翰通律師事務(wù)所 31319
• 代理人: 夏思秋

1.一種利用單烯醇酮醋酸酯制備布瑞諾龍的方法，其特征在于，所述方法的反應(yīng)過(guò)程如反應(yīng)式(I)所示：

具體步驟如下：

(1)氫化反應(yīng)：在有機(jī)溶劑中，單烯醇酮醋酸酯、氫氣、催化劑在加熱條件下進(jìn)行氫化反應(yīng)，然后在無(wú)機(jī)堿存在下進(jìn)行水解反應(yīng)，得5α-孕甾烷-3β-羥基-20-酮；所述催化劑選自鈀/炭、鈀/碳酸鈣、鈀/硫酸鋇、活性鎳、二氧化鉑中的一種或多種；反應(yīng)過(guò)程如反應(yīng)式(1)所示：

(2)氧化反應(yīng)：將所述步驟(1)得到的5α-孕甾烷-3β-羥基-20-酮溶于有機(jī)溶劑中，在氧化劑和催化劑存在下控溫反應(yīng)，得5α-孕甾烷-3,20-二酮；所述催化劑選自四甲基哌啶氧化物TEMPO、4-羥基-四甲基哌啶氧化物、4-芐酰氧基-四甲基哌啶氧化物中的一種或多種；反應(yīng)過(guò)程如反應(yīng)式(2)所示：

(3)酶催化還原反應(yīng)：所述步驟(2)得到的5α-孕甾烷-3,20-二酮在有機(jī)溶劑、堿、還原酶和輔酶存在下，經(jīng)酶催化還原反應(yīng)，得目標(biāo)產(chǎn)物布瑞諾龍；所述還原酶為羰基還原酶RH，所述羰基還原酶RH的蛋白序列如SEQ ID NO.1所示；所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉中的一種或多種；所述酶催化還原反應(yīng)的溫度為25℃-35℃；反應(yīng)過(guò)程如反應(yīng)式(3)所示：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述有機(jī)溶劑選自乙醇、甲醇、異丙醇、四氫呋喃、甲苯、醋酸乙酯中的一種或幾種；和/或，所述無(wú)機(jī)堿選自碳酸鉀、碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉中的一種或多種。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述單烯醇酮醋酸酯、氫氣、催化劑、無(wú)機(jī)堿的質(zhì)量比為1：(0.01-0.1)：(0.03-0.1)：(0.2-0.3)。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述氫化反應(yīng)的溫度為45-65℃；和/或，所述水解反應(yīng)的溫度為25-78℃。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、甲苯、醋酸乙酯、2-甲基四氫呋喃中的一種或幾種；和/或，所述氧化劑選自次氯酸鈉、三氧化二鉻、PCC、PDC、重鉻酸鈉、重鉻酸鉀中的一種或多種。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述5α-孕甾烷-3β-羥基-20-酮、氧化劑、催化劑的質(zhì)量比為1：(3.5-4.5)：(0.03-0.05)；和/或，所述氧化反應(yīng)的溫度為0℃-25℃。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑選自甲基叔丁基醚、醋酸乙酯、甲基異丁基酮、異丙醇、叔丁醇、甲醇中的一種或多種。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述輔酶選自NAD⁺、NADP⁺、NADH、NADPH中的一種或多種。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述5α-孕甾烷-3,20-二酮、堿、還原酶和輔酶的質(zhì)量比為1：(0.12-0.15)：(0.4-1)：(0.0004-0.001)。