[發明專利]一種環狀circRNA AFF1及其應用

在審

• 申請號: 202011298834.7
• 申請日: 2020-11-19
• 公開（公告）號: CN112410417A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 陳雙;王紅光;閆華;馮韌;賴科觀;吳海東;呂欣澤;李咪咪;鮑靜雨;楊學佳
• 申請（專利權）人: 旭和（天津）醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 北京沁優知識產權代理有限公司 11684
• 代理人: 另婧

本發明屬于生物醫學檢驗領域，具體地說，涉及一種用于診斷蛛網膜下腔出血(SAH)的環狀circRNA AFF1，還涉及該環狀circRNA AFF1在診斷蛛網膜下腔出血(SAH)中的應用以及相關的試劑盒。所述環狀RNA circRNA AFF1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本發明通過提取外周血血漿中的RNA后，發現circRNA AFF1作為一個重要的生物學檢測指標，可應用于定量檢測，從而判定患者是否存在SAH風險，實現SAH患者的早診、早防、早治，在蛛網膜下腔出血(SAH)的早期診斷、鑒別診斷中具有重要作用。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢驗領域，具體地說，涉及一種用于診斷蛛網膜下腔出血(SAH)的環狀circRNA AFF1，還涉及該環狀circRNA AFF1在診斷蛛網膜下腔出血(SAH)中的應用以及相關的試劑盒。

背景技術

蛛網膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)是一種神經系統急癥，死亡率為50％。除動脈瘤破裂引起，其余發病原因不清，而發病后再出血的尤其危險。究其原因，均與血管功能異常關系密切。SAH不僅對中樞神經系統造成毀滅性打擊，而且對其他多個器官產生嚴重影響，最常見的并發癥是由于腦組織缺血、缺氧造成的神經功能缺失，遺留永久的神經功能障礙。

SAH作為是一種突發性高致死率的神經系統疾病，長期以來其診斷主要依賴于CT等影像學手段，針對該疾病的早期診斷及復發引起的再次出血缺乏有效的診斷手段。因此，深入研究SAH的發生發展過程，尋找關鍵的分子標志物和藥物靶點，對開發有效的診斷、治療措施具有重要的科學意義和臨床價值。

環狀RNA(circRNA)是最近幾年發現的一類在哺乳動物體內廣泛存在的非編碼RNA，其表達豐富，是由特殊的末端反向互補的前體mRNA經過可變剪切形成。circRNA首尾相連形成閉合環狀結構使其比線性RNA更加穩定，能夠耐受核酸外切酶的降解。同時，circRNA的表達具有組織及細胞類型的特異性，并且在血液、唾液、尿液或外泌體中也能檢測到豐富的circRNA。circRNA的這些特征表明它具有作為疾病診斷標志物的潛能。

SAH與血管功能異常及由于缺氧造成的血管應激損傷存在密切聯系，缺氧狀態下血管內皮細胞中CircRNA AFF1存在異常激活，從而導致Hippo/YAP信號通路中的最終效應因子YAP磷酸化水平上調，最終造成血管再生及修復功能部分喪失。通過患者標本的高通量環狀RNA測序分析，篩選發現circAFF1在缺氧性血管損傷中異常升高，在影像學表現之前即可擴散進入外周血，具有一定的早期預警的臨床意義。

發明內容

基于上述問題，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種快速、靈敏、特異的蛛網膜下腔出血(SAH)的診斷指標以及相應的診斷試劑盒。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案包括以下幾個方面：

在第一個方面，本發明提供了一種環狀circRNA AFF1，所述環狀RNA circRNAAFF1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

在第二個方面，本發明提供了一種蛛網膜下腔出血的分子標志物，所述分子標志物為環狀circRNA AFF1。

本發明發現蛛網膜下腔出血患者中circAFF1的上調，因此，其可以作為蛛網膜下腔出血的一個重要的生物學檢測指標，可應用于定量檢測，從而判定患者是否存在SAH風險，實現SAH患者的早診、早防、早治，在蛛網膜下腔出血(SAH)的早期診斷、鑒別診斷中具有重要作用。

在第三個方面，本發明提供了環狀circRNA AFF1定量檢測劑在制備蛛網膜下腔出血的診斷試劑盒中的應用。

其中，所述定量檢測試劑為能擴增出環狀circRNA AFF1的qRT-PCR引物，所述qRT-PCR引物的上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示。