[發明專利]一種氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢測方法

有效

• 申請號: 202011294497.4
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112462015B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 宮學金;陳羽;劉雨佳;李鳳英;羅鳴;黃浩喜;蘇忠海
• 申請（專利權）人: 海南倍特藥業有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/50;G01N33/579;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所(有限合伙) 51213
• 代理人: 胡慧東

本發明公開了一種氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢測方法，包括如下步驟：鱟試劑靈敏度復核；確定氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素限值以及最小稀釋濃度；方法進行干擾實驗，確認不存在干擾的供試品濃度；實驗中用10?30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供試品，并用細菌內毒素檢測用水稀釋得到供試品溶液；氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素檢查：用10?30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氫溴酸瑞馬唑侖供試品，并用細菌內毒素檢查用水稀釋至不存在干擾的有效濃度進行細菌內毒素檢查。該方法用一定濃度的聚山梨酯?80水溶液溶解樣品，可以消除供試品對細菌內毒素的干擾作用，方法簡便易操作，實用性高。

技術領域

本發明涉及細菌內毒素的檢測技術領域，具體涉及一種氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢測方法。

背景技術

細菌內毒素是革蘭氏隱形細菌所產生的具有各種生物活性的大分子物質，其主要化學成分為脂多糖，內毒素是注射劑藥品(原料等)中的主要污染物質。

鱟試驗法是細菌內毒素的常用檢測方法，其利用鱟試劑與內毒素發生凝集反應的機理，以定性或定量檢測藥品或機體血液中的感染細菌內毒素的一種體外檢測方法。

藥典中細菌內毒素檢查一般用細菌內毒素檢查用水溶解、稀釋，然而，本發明人在研究過程中發現，用細菌內毒素檢查用水(BET水)溶解并稀釋氫溴酸瑞馬唑侖，對其細菌內毒素檢測有抑制干擾作用，無法進行氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢查。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢測方法，該方法選用一定濃度的聚山梨酯-80溶解樣品，可以消除氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素檢查過程中的抑制干擾作用。

為了達到上述技術效果，本發明提供了如下技術方案：

一種氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素的檢測方法，包括如下步驟：

(1)鱟試劑靈敏度復核，確保鱟試劑靈敏度結果在0.5λ～2.0λ之間；

(2)確定氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素限值以及最小稀釋濃度；

(3)進行干擾實驗，確認不存在干擾的供試品濃度；實驗中用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供試品，并用細菌內毒素檢測用水稀釋得到供試品溶液；

(4)氫溴酸瑞馬唑侖細菌內毒素檢查：用10-30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氫溴酸瑞馬唑侖供試品，并用細菌內毒素檢查用水稀釋至不存在干擾的有效濃度進行細菌內毒素檢查。

其中，步驟(3)中的干擾試驗，具體操作過程依據《中國藥典》2020年版四部通則1143細菌內毒素檢查法(凝膠法)進行細菌內毒素干擾實驗。

進一步地，步驟(3)中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供試品。

進一步地，步驟(4)中，用10-20mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解供試品。

進一步地，在干擾實驗之前，進行干擾預實驗，初步確認不存在抑制干擾的供試品濃度范圍。

進一步地，干擾預實驗中，采用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用細菌內毒素檢查用水稀釋供試品。

進一步地，干擾預實驗中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用細菌內毒素檢查用水稀釋供試品。

進一步地，干擾試驗之后，進行細菌內毒素回收試驗，確認用10-30mg/ml聚山梨酯80水溶液溶解供試品并用細菌內毒素檢查用水稀釋得到的供試品溶液用于對供試品細菌內毒素檢查不存在干擾。

進一步地，供試品細菌內毒素限值定為每1mg氫溴酸瑞馬唑侖中含細菌內毒素的量不超過0.1EU。