[發明專利]一種具有pH和還原雙敏感的納米疫苗的制備方法及所得產品

在審

• 申請號: 202011293756.1
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112315941A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 楊永;蘇乾洪;符釗銘;馬榮英
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/10;A61K47/69;A61K47/58;A61K47/52;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

本發明公開了一種具有pH和還原雙敏感的納米疫苗的制備方法及所得產品，本發明以PEI修飾的介孔二氧化硅納米球為原料，通過靜電作用吸附模型抗原，然后再外層包裹具有還原敏感二硫鍵的金屬酚醛網絡作為保護網絡，得到納米疫苗。本發明制備方法操作簡便，能耗低，環境友好，易于擴大生產，所得納米疫苗具有很好的體內長期穩定性和生物相容性，并對腫瘤具有顯著的治療和預防效果。

技術領域

本發明涉及一種具有pH和還原雙敏感的納米疫苗的制備方法及所得產品，屬于納米材料制備技術領域。

背景技術

在用作遞送腫瘤特異性抗原的載體的多種納米材料中，介孔二氧化硅納米粒子（MSN）由于其高負載能力，易于表面性質改善和良好的生物相容性而有望成為首選。然而，由于抗原交叉呈遞效率低下，一般的MSN無法滿足引起有效的抗癌細胞免疫應答的要求。考慮到這一點，可以用通過質子海綿效應促進溶酶體逃逸，并由此誘導強烈的細胞免疫的聚乙烯亞胺（PEI）來修飾MSN，以改善納米載體的佐劑作用。然而，暴露的PEI在一定程度上對正常組織細胞有毒和有害，并且負載的抗原可能易于從組織液中的MSN上解離。因此，有必要在抗原-載體復合物周圍附加生物安全和保護性網絡以解決這些問題。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種具有pH和還原雙敏感的納米疫苗的制備方法及所得納米疫苗，該方法對負載抗原的PEI修飾MSN進行包裹，使其同時具有pH和還原雙敏感性，以提高疫苗蛋白的靶向遞送效率和交叉遞呈，促進免疫應答。

金屬酚網絡（MPN）是由金屬離子與多酚之間的配位相互作用建立的一系列超分子網絡結構。MPN由于具有一些獨特的優勢，例如簡單的合成以及與人體組織的良性生物相容性，因此可以用作生物材料。本發明以聚乙烯亞胺修飾介孔二氧化硅納米顆粒為原料，通過靜電作用吸附模型抗原，形成負載抗原的PEI修飾MSN，然后通過簡單的絡合反應在負載抗原的PEI修飾MSN周圍包裹上含有大量還原敏感性二硫鍵的MPN，形成納米疫苗。該納米疫苗以具有還原敏感二硫鍵的金屬酚醛網絡作為保護網絡，生物安全性提高，抗原不易解離，抗原的靶向遞送效率和交叉遞呈效率提高，能夠引發有效的細胞免疫反應，提高癌癥免疫療法的療效。

本發明技術方案如下：

一種具有pH和還原雙敏感的納米疫苗的制備方法，該方法包括以下步驟：

（1）將PEI修飾的介孔二氧化硅納米球懸浮在水中，然后將抗原溶液加入上述懸浮液中，充分振搖，通過靜電吸附實現PEI修飾的介孔二氧化硅納米球對抗原的負載；

（2）將4-(2-氨基乙基)-1,2-苯二酚鹽酸鹽、二甲基氨基吡啶和N-琥珀酰亞胺基3-（2-吡啶基二硫代）丙酸酯溶解在溶劑中，在氣體保護下攪拌反應，然后再加入具有巰基末端的八臂聚乙二醇繼續反應，得到鄰苯二酚封端的八臂聚乙二醇；

（3）將步驟（1）得到的負載有抗原的PEI修飾的介孔二氧化硅納米球分散在水中，然后加入鄰苯二酚封端的八臂聚乙二醇、FeCl₃溶液和Tris-HCl緩沖液進行反應，得具有pH和還原雙敏感的納米疫苗。

進一步的，所述PEI修飾的介孔二氧化硅納米球可以采用現有技術中公開的方法進行制備。本發明某一具體實施方式中，提供了一種制備方法，如下：將介孔二氧化硅納米球超聲分散在水中，然后加入聚乙烯亞胺溶液，充分攪拌混合，離心、洗滌，得到PEI修飾的介孔二氧化硅納米球。該方法中，優選的，聚乙烯亞胺與介孔二氧化硅納米球的質量比為2-3:1。優選的，攪拌混合時間為1.5~2.5 h。

進一步的，步驟（1）中，所述抗原為卵清蛋白（OVA）。

進一步的，步驟（1）中，PEI修飾的介孔二氧化硅納米球（簡稱PMSN）與抗原的質量比為1：0.8-1。一般的，PMSN懸浮在水中的濃度為1.8~2 mg/mL，抗原溶液的濃度為1.6~2.0mg/mL。