[發(fā)明專利]一種噻蟲胺人工抗原在酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用

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• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112595850A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬宇平;何方洋;吳小勝;趙正苗;王兆芹;劉玉梅
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/53
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本發(fā)明提供了一種檢測噻蟲胺的酶聯(lián)免疫試劑盒，它包括：包被有包被原的酶標(biāo)板、噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、噻蟲胺抗體、酶結(jié)合物濃縮液、酶結(jié)合物稀釋液、底物顯色液、終止液、洗滌液，所述包被原為噻蟲胺偶聯(lián)抗原，所述酶結(jié)合物為酶標(biāo)記的噻蟲胺抗體，所述噻蟲胺抗體是由免疫原免疫動物得到的。本發(fā)明還公開了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測噻蟲胺的方法，它包括：首先進(jìn)行樣品前處理，然后用試劑盒進(jìn)行檢測，最后分析檢測結(jié)果。本發(fā)明提供的酶聯(lián)免疫試劑盒可用于檢測農(nóng)作物樣本中噻蟲胺的含量，其操作簡便、費(fèi)用低廉、靈敏度高、能夠現(xiàn)場監(jiān)控且適合大量樣本的篩查。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種噻蟲胺人工抗原在酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用技術(shù)，具體涉及一種噻蟲胺人工抗原分子結(jié)構(gòu)以及用于檢測噻蟲胺的酶聯(lián)免疫試劑盒，可定性、定量檢測農(nóng)作物中噻蟲胺藥物的殘留量。

背景技術(shù)

噻蟲胺是新煙堿類中的一種殺蟲劑，是一類高效安全、高選擇性的新型殺蟲劑，其作用與煙堿乙酰膽堿受體類似，具有觸殺、胃毒和內(nèi)吸活性。主要用于水稻、蔬菜、果樹及其他作物上防治蚜蟲、葉蟬、薊馬、飛虱等半翅目、鞘翅目、雙翅目和某些鱗翅目類害蟲的殺蟲劑，具有高效、廣譜、用量少、毒性低、藥效持效期長、對作物無藥害、使用安全、與常規(guī)農(nóng)藥無交互抗性等優(yōu)點(diǎn)，有卓越的內(nèi)吸和滲透作用，是替代高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的又一品種。其結(jié)構(gòu)新穎、特殊，性能與傳統(tǒng)煙堿類殺蟲劑相比更為優(yōu)異，有可能成為世界性的大型殺蟲劑品種。

檢測噻蟲胺的方法有高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜法等，與上述方法相比，免疫化學(xué)檢測法對藥物檢測具有快速、特異、靈敏、準(zhǔn)確、可以批量監(jiān)測、樣品處理簡單、能實(shí)現(xiàn)自動化操作等優(yōu)點(diǎn)。而免疫化學(xué)法檢測噻蟲胺的前提是需要具備針對噻蟲胺的抗體，本申請發(fā)明了噻蟲胺人工抗原制備方法，并將其應(yīng)用于酶聯(lián)免疫試劑盒中，用時短，操作簡單，成本較低，適用于基層單位大批量地檢測樣品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能夠檢測農(nóng)作物中噻蟲胺藥物殘留量的酶聯(lián)免疫試劑盒，并提供一種高效、準(zhǔn)確、簡便、適于大批量樣品篩選的定性、定量檢測方法。

本發(fā)明試劑盒，它包括：包被有包被原的酶標(biāo)板、噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、噻蟲胺抗體、酶結(jié)合物濃縮液、酶結(jié)合物稀釋液、底物顯色液、終止液、洗滌液，所述包被原為噻蟲胺偶聯(lián)抗原，所述酶結(jié)合物為酶標(biāo)記的噻蟲胺抗體。

所述噻蟲胺特異性抗體是以一種噻蟲胺人工抗原作為免疫原制備獲得，所述噻蟲胺特異性抗體可為噻蟲胺單克隆抗體或噻蟲胺多克隆抗體，其中優(yōu)選噻蟲胺單克隆抗體。

所述酶結(jié)合物的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶，其中優(yōu)選辣根過氧化物酶；酶結(jié)合物是由酶和噻蟲胺抗體偶聯(lián)得到的。

為了更方便現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查，所述試劑盒還包括噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液。

所述噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0μg/L，1μg/L，2μg/L，4μg/L，8μg/L，16μg/L。

當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時，所述底物顯色液由底物液A液和底物液B液組成，A為過氧化氫或過氧化脲，B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，所述終止液為1～2mol/L的硫酸溶液或鹽酸緩沖液；當(dāng)標(biāo)記酶為細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶時，所述底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液，所述終止液為1～2mol/L氫氧化鈉溶液。

所述洗滌液優(yōu)選為pH值為7.4，含有0.5％～1.0％吐溫-20、0.01‰～0.03‰疊氮化鈉防腐劑、0.1～0.3mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比。

其中在酶標(biāo)板制備過程中所用到的包被緩沖液為pH值為9.6，0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，封閉液為pH值為7.1～7.5，含有1％～3％酪蛋白、0.1～0.3mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比。