[發(fā)明專利]用于核酸檢測的組合物和方法

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• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112375812A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 惠文利;崔亞麗;梁建萍;黃曉娟;董晨;朱娟莉;劉梟男
• 申請（專利權(quán)）人: 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京悅成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11527
• 代理人: 樊耀峰

1.一種用于核酸檢測的組合物，其特征在于，包括用于等溫擴增核酸的LAMP系統(tǒng)和用于顯示擴增結(jié)果的層析系統(tǒng)，其中：

所述LAMP系統(tǒng)包括兩條外引物和兩條內(nèi)引物，且在至少一條內(nèi)引物上標(biāo)記有能夠與金磁顆粒結(jié)合的結(jié)合分子；

所述層析系統(tǒng)包括金磁顆粒和層析介質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述核酸檢測是指檢測核酸的SNP單位點信息，所述LAMP系統(tǒng)進一步包括環(huán)引物，且所述環(huán)引物的互補序列位于所述內(nèi)引物互補序列的下游，所述內(nèi)引物包括野生型特異性引物和突變型特異性引物；在所述野生型特異性引物和所述突變型特異性引物的5’端分別標(biāo)記生物素，且在所述環(huán)引物5’端標(biāo)記地高辛，或者在所述野生型特異性引物和所述突變型特異性引物的5’端分別標(biāo)記地高辛，且在所述環(huán)引物5’端標(biāo)記生物素。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，在所述野生型特異性引物和所述突變型特異性引物內(nèi)分別引入錯配堿基，從而增強特異性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述錯配堿基的數(shù)量為1-3，且位于SNP單位點的上游或下游。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述外引物的序列選自SEQ ID NO:1-2、8-9所示的序列，所述內(nèi)引物的序列選自SEQ ID NO:3-6、10-13所示的序列，和所述環(huán)引物的序列選自SEQ ID NO:7和14所示的序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，進一步包括防污染系統(tǒng)，所述防污染系統(tǒng)只需使所述LAMP系統(tǒng)在25℃～40℃下孵育即可消除由空氣引進入到系統(tǒng)的污染。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述核酸檢測是指針對病原微生物的檢測，且兩條內(nèi)引物分別標(biāo)記不同的結(jié)合分子，所述結(jié)合分子選自生物素或地高辛。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述外引物的序列選自SEQ ID NO:15-16、19-20、23-24、27-28所示的序列，所述內(nèi)引物的序列選自SEQ ID NO:17-18、21-22、25-26、29-30所示的序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸檢測的組合物，其特征在于，所述金磁顆粒的表面偶聯(lián)有地高辛抗體，且所述層析介質(zhì)上標(biāo)記鏈霉親和素分子。

10.一種用于核酸檢測的非診斷方法，其特征在于，包括使用根據(jù)權(quán)利要求1～9任一項所述的組合物的步驟。