[發明專利]一種抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 202011288759.6
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112390878B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 丁國偉;范娟;葉正琴;包菲;魏榮榮;李琛;陳林中日;潘晨
• 申請（專利權）人: 揚州優邦生物藥品有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/42;A61P31/20;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了一種抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體及其制備方法，屬于基因工程技術領域。本發明采用RT?PCR直接從抗小鵝瘟病毒單克隆細胞RNA中擴增出抗體編碼基因的重鏈可變區基因和輕鏈可變區基因，利用SOE?PCR法將linker與VH基因和VL基因相連構建單鏈抗體基因，并將其克隆到表達載體pET?28a中，ELISA確定抗單鏈抗體的活性。本發明將抗小鵝瘟病毒的基因工程抗體能與小鵝瘟病毒特異性結合，能夠用于小鵝瘟病毒的預防和治療。

技術領域

本發明涉及一種抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體及其制備方法，屬于基因工程技術領域。

背景技術

小鵝瘟(Goslingplague)是由小鵝瘟病毒(Goslingplaguevirus，GPV)，也稱為鵝細小病毒引起的雛鵝急性或亞急性的敗血性傳染病。本病主要侵害4～20日齡的易感雛鵝，具有傳播快、發病率高和致死率高的特點。隨著雛鵝日齡增長，其發病率和致死率下降。

雛鵝卵黃抗體接種是預防、控制小鵝瘟的主要措施之一。但傳統的卵黃抗體生產不僅生產成本較高、生產周期較長，而且雞胚生產工藝還會造成較大的環保危害。

單鏈抗體是一種基因工程抗體，以其分子量小、特異性高、穿透力強、易于改造等特點，顯示了巨大的應用潛力，越來越受到人們的重視。因此研制一種生產成本低、生產效率高的抗小鵝瘟病毒抗體的生產方法具有重要的現實意義。

發明內容

[技術問題]

現有技術中缺少抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體及相應的高效的生產方法。

[技術方案]

本發明提供了一種抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體，該單鏈抗體能夠與小鵝瘟病毒特異性結合，可用于阻斷小鵝瘟病毒的感染和入侵。

所述抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體，具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的輕鏈可變區VL、如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的重鏈可變區VH和位于輕鏈可變區VL與重鏈可變區VH之間的中間連接肽linker，所述中間連接肽linker為GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No.5)。所述抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

本發明還提供一種編碼上述抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體的基因，其具有SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列。

本發明還提供一種表達上述的單鏈抗體的載體，所述載體為原核表達載體。優選的，所述原核表達載體為pET-28a-gpv-ScFv載體。

本發明還提供一種上述小鵝瘟病毒的單鏈抗體的制備方法，具體步驟如下：

(1)采用RT-PCR直接從抗小鵝瘟病毒的單克隆細胞株的RNA中擴增出抗體編碼基因的重鏈可變區VH基因和輕鏈可變區VL基因；

(2)利用Overlap-PCR法將連接肽linker與VH基因和VL基因相連構建單鏈抗體基因；

(3)將步驟(2)的單鏈抗體基因克隆到pET-28a載體中構建重組質粒pET-28a-gpv-ScFv；

(4)將步驟(3)的重組質粒pET-28a-gpv-ScFv化入E.coliBL21(DE3)感受態細胞，獲得能夠表達抗小鵝瘟病毒的單鏈抗體重組菌株，利用重組菌株制備單鏈抗體；

(5)將步驟(4)獲得的單鏈抗體用以小鵝瘟病毒作為包被抗原進行ELISA鑒定，確定重組單鏈抗體的活性。

本發明還涉及編碼所述抗小鵝瘟病毒的抗體的基因。例如，具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

本發明還涉及攜帶編碼所述抗小鵝瘟病毒的抗體的基因的載體或細胞。

本發明還涉及藥物組合物，其包含藥物有效量的所述的抗小鵝瘟病毒的抗體。