[發明專利]一種用于檢測肝癌的試劑組合，試劑盒及其用途

有效

• 申請號: 202011288235.7
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112501293B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 陳明;郭鑫武;洪梅;劉讓蛟;戴立忠
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 胡亮;張穎玲

本發明提供了一種用于檢測肝癌的試劑組合，所述試劑組合包括用于檢測OTX1基因的以下甲基化位點中至少一個的甲基化水平的檢測試劑：cg23229261、cg10122865。與此同時，本發明還提供了該試劑組合的用途，以及包括該試劑組合的試劑盒。使用本發明的試劑組合，在組織樣本中能以至少0.846的特異性和0.860的靈敏度以及0.914的曲線下面積對肝癌進行預測，在血漿的游離DNA樣本中，能以至少0.8298的特異性和0.778的靈敏度以及0.8823的曲線下面積對肝癌進行預測，本發明試劑組合以較少的標志物就能夠在臨床上以高靈敏度和好特異性對肝癌進行檢測，成本和時間均得到節約；在臨床上，在肝臟惡變的早期階段就能靈敏和特異性地檢出。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，具體地，屬于肝癌檢測領域，更具體地，涉及肝癌基因標志物的甲基化水平的檢測。

背景技術

肝癌是世界上最常見的和最致命的疾病之一，危害極大的惡性腫瘤。肝癌起病隱匿，早期無特異性癥狀，大多數肝癌患者在就診時已是中晚期，手術治愈率低，生存期短。

目前，血清甲胎蛋白(alpha fetal protein，AFP)和超聲檢查是當前臨床上診斷肝癌常用而又重要的方法，然而其靈敏度和特異度并不理想。AFP篩查的靈敏度只能達到40-60％，許多早期肝癌患者的AFP水平總是維持在一個正常水平；而在相當一部分肝病患者中也存在著AFP異常升高的情況；超聲檢測則非常依賴于儀器和人為操作，受醫療資源分布的限制和醫生的經驗影響；超聲造影和穿刺等檢查則存在操作復雜、創傷等缺點，不適用于早篩早診。尋找準確、穩定、有效的肝癌分子標志物對肝癌進行早期診斷、早期治療具有重要意義。

腫瘤標志物檢測是近年發展起來的用于檢測疾病的方法，而尋找準確、穩定、有效的肝癌分子標志物對肝癌進行早期診斷、早期治療具有重要意義。而隨著科學界對腫瘤的認識逐漸深入，越來越多的研究證實細胞表觀遺傳水平的改變是腫瘤發生與發展的關鍵事件。DNA甲基化、組蛋白修飾及miRNA表達異常均屬于表觀遺傳學改變，而腫瘤發生的核心環節也與DNA異常甲基化相關。DNA甲基化檢測穩定性好，易于檢測且其異常程度常與癌癥的進展相關，是最具腫瘤早篩潛力的標志物，目前已有基于DNA甲基化檢測的結直腸癌、胃癌等腫瘤輔助診斷產品獲得FDA或CFDA的認證，但尚無肝癌的篩查產品獲批上市。

很多研究通過檢測外周血中的腫瘤細胞或DNA甲基化變化，尋找用于肝癌早期診斷的標志物。美國Exact Sciences公司基于甲基化檢測的早期肝癌篩查臨床研究顯示，在135例HCC(Hepatocellular Carcinoma)病例和308例對照參與的臨床試驗中，這一血液檢測在診斷早期HCC患者時達到了71％的靈敏度度和90％的特異性。該項目獲得了FDA突破性醫療器械認定，但其臨床研究主要基于歐美人群且存在靈敏度偏低的缺陷；專利CN107164508A通過檢測9個基因的5-羥甲基胞嘧啶含量檢測肝癌，其具有較優良的檢測性能，靈敏度為90％，特異性為91.3％，但其入組的樣本并不包含肝硬化、肝炎等肝癌高風險人群，因此可能存在特異性偏低的不足。

因此，本領域需求一種基于DNA甲基化檢測的兼具高靈敏度高特異性的肝癌診斷產品，在肝癌的早期階段即能進行檢出。

發明內容

本發明通過在TCGA和GEO數據庫搜集和構建肝癌相關的甲基化大數據集，采用生物信息學方法篩選出有應用開發潛力的肝癌DNA甲基化標志物，通過大量研究，申請人發現OTX1基因的甲基化位點的甲基化水平與肝癌有著密切的聯系。

第一方面，本發明提供一種用于檢測肝癌的試劑組合，所述試劑組合包括用于檢測OTX1基因的以下甲基化位點中至少一個的甲基化水平的檢測試劑： cg23229261、cg10122865。

進一步地，所述試劑組合包括用于檢測OTX1基因的以下兩個甲基化位點的甲基化水平的檢測試劑：cg23229261和cg10122865。