[發明專利]構建用于篩查乳粉中化學危害物的液質數據庫的方法

有效

• 申請號: 202011285832.4
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112461962B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 張鴻偉;王惠;張曉梅;張峰;聶晨;宋翠平;宮小明
• 申請（專利權）人: 青島海關技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種構建用于篩查乳粉/基粉中化學危害物的液質數據庫的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)基粉/乳粉的前處理；

(2)使用液相色譜-級聯質譜對乳粉成分進行檢測并收集質譜數據；

(3)數據采集與處理；

步驟(1)所述的基粉/乳粉前處理步驟包括：

1)精密稱取乳粉，加入去離子水充分攪拌至完全溶解，配制混合乳液，放置4℃保存；

2)混合乳液中加入冰乙腈，渦旋振蕩后，8000g，離心5min后取上清溶液，上清液脫脂處理；

3)提取上清液后剩余液體中加入MgSO₄和NaCl，渦旋振蕩混勻后，進行鹽析，5000g離心3min后取上清溶液；

4)步驟3)的上清液與步驟2)中的脫脂上清液混合后，渦旋振蕩混勻，5000g離心3min取上清液，氮氣流吹干后，用體積比1:1的甲醇/水復溶，至濾器中過濾；

步驟(2)所述的使用液相色譜-級聯質譜對乳粉成分進行檢測的步驟為；

液相色譜的方法為：

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱；

流動相：

1)正離子模式：A液：0.1％甲酸-5mM甲酸銨-水溶液，B液：0.1％甲酸-乙腈；

2)負離子模式：A液：5mM甲酸銨-水溶液，B液：乙腈；

梯度洗脫，正負離子洗脫程序相同，洗脫程序為；

流速：0.2mL/min；

柱溫：40℃；

進樣量：20μL；

2)級聯質譜的方法為：

離子源：ESI源；

采集方式及參數設置：

Ⅰ、TOF MS-DIA-Product Ion，正/負離子檢測，具體參數如下：

TOF MS掃描質量數范圍：50-1200Da；

TOF MS采集累積時間：0.25s；

IDA采集閾值：100cps；

Product Ion采集累積時間：0.075s；

電噴霧電壓：5500V/-4500V；

解聚電壓：80V；

碰撞能量：35±15/-35±15；

離子源溫度：500℃；

霧化氣壓力：50psi；

氣簾氣壓力：30psi；

輔助氣壓力：50psi；

Ⅱ、Sequential Windowed Acquisition of All Theoretical Fragment Ion，正/負離子檢測，具體參數如下：

碰撞能量：35±15/-35±15；

噴霧電壓：5500V/-4500V；

離子源溫度：500℃；

霧化氣壓力：50psi；

氣簾氣壓力：30psi；

輔助氣壓力：50psi；

步驟(3)所述的數據采集與處理的步驟為：

1)SWATH采集包含TOF MS掃描200ms，每個50ms的SWATH掃描窗口；

2)基粉樣品IDA掃描數據通過運算得到：

3)將SWATH數據進行二級質譜解卷積，設置參數如下：

數據采集MS1和MS2質量偏差容許分別為0.01Da和0.025Da；

數據采集時間范圍是1.5min-28min；

MS1和MS2采集范圍分別是100-1200Da和50-1200Da；

最大電荷數為2；

最小峰高為500cps；

質量塊寬度為0.1Da；

MS2解卷積豐度扣除為10cps；

正離子掃描模式的加合離子為[M+H]⁺、[M+NH₄]⁺、[M+Na]⁺、[M+CH₃OH+H]⁺、[M+H-H₂O]⁺、[M+2H]²⁺、[M+CH₃OH+H]²⁺、[M+H]²⁺、[M+H-2H₂O]²⁺、[M+HCOOH+H]⁺、[M+H-H₂O]²⁺、[M+Na]²⁺、[M+NH₄]²⁺；

負離子掃描模式的加合離子為[M-H]^-、[2M-H]^-、[M+Cl]^-、[M-H₂O-H]^-、[M+FA-H]^-、[M+Na-2H]^-、[2M-H]^2-、[M+Na-2H]-、[M+Na-2H]^2-、[M+NH₃-H]^-、[M-2H]^2-、[M+K-2H]^-；

4)經解卷積的樣品數據扣除空白溶劑后，對解卷積得到的二級質譜信息進一步過濾：選取碎片離子豐度前10強的離子，并扣除與母離子相差小于12Da的碎片離子，最終得到乳粉基粉正離子二級質譜數據庫和乳粉基粉負離子二級質譜數據庫。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

1)每克乳粉加入125ml去離子水配制混合乳液；

2)混合乳液和冰乙腈的體積比為1：3，提取的上清液的量為混合液的1/5～1/4，脫脂處理的方法為使用除脂萃取管進行脫脂；

3)MgSO₄的加入量為剩余液體量的質量比1/7～1/6；NaCl的加入量為剩余液體的質量比1/35～1/30；取上清液的量約為鹽析后溶液體積的1/4～1/3；

4)提取的上清液的量為混合液的1/3～1/2，氮氣吹干時的溫度為40℃，所述的濾器為Mini-UniPrep非針頭式濾器。