[發明專利]脂結合小肽SSIP1在介導其融合蛋白進入細胞中的應用

有效

• 申請號: 202011285678.0
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112359066B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 李曉云;盤詩雨;陳容欽
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C12N15/88
• 分類號: C12N15/88
• 代理公司: 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367
• 代理人: 李思坪

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及脂結合小肽SSIP1在介導其融合蛋白進入細胞中的應用，經實驗研究發現，用脂質體預包埋SSIP1?GFP后，滴加進培養的原生質體或培養的動物細胞中，SSIP1及其融合蛋白可以進入植物細胞或者動物細胞中；將脂質體預包埋后的SSIP?GFP滴加于擬南芥花器官柱頭，可觀察到不同程度的綠色熒光表達于花粉導管，在長出來的果柄和果皮也可以觀察到綠色熒光，說明SSIP1可作為導肽載體，在不改變基因組的情況下，可快速引導目的蛋白進入胚胎細胞。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及脂結合小肽SSIP1在介導其融合蛋白進入細胞中的應用。

背景技術

脂質體是一種優質的藥物載體，類似于生物膜，由磷脂雙分子定向排列而成超細納米微囊，可將藥物分子包裹在微囊中，改變給藥途徑，避免藥物分子過快被分解掉，使藥物具有靶向性和緩釋性，具有提高和延長療效，改變給藥途徑等特點。目前，脂質體已經廣泛應用于包埋功能性多肽和蛋白質。例如，包埋乳鐵蛋白,脂肪酶，霉菌蛋白酶，風味蛋白酶，輔酶Q，蛋白清抗氧化肽，花生短肽、谷胱甘肽，抗氧化肽，人表皮生長因子(hEGF)等，提高了蛋白的利用率，穩定酶活及肽活性。

SSIP1小肽來源于擬南芥，在擬南芥中單一拷貝，全長74個氨基酸，相對分子質量為8.9KD(與脂結合后為17-25KD)，目前其功能及是否存在受體尚不清楚。研究表明，在芥菜，胡蘿卜，甘薯，花生等雙子葉植物中發現有SSIP1的同源基因，但單子葉水稻和玉米中沒有發現其同系物。故其在玉米和水稻等單子葉的育種、觀賞花卉培養中具有潛在的應用價值，但受轉基因農作物的法律規制，轉基因農作物的安全性和風險性仍不清楚，推廣應用仍受限制。

因此，有必要在不改變基因組的情況下，將SSIP1小肽應用于玉米和水稻等單子葉的育種、觀賞花卉培養中。目前，尚未有關于利用SSIP1介導其融合蛋白進入細胞中的報道。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明提出了脂結合小肽SSIP1在介導其融合蛋白進入細胞中的應用，提出了一種脂質體包埋SSIP1肽瞬轉原生質體或植株的方法，該方法在不改變基因組的情況下，通過脂質體包埋的方法，由SSIP1介導其融合蛋白進入細胞或體內。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

本發明提供SSIP1在介導其融合蛋白進入細胞中的應用。

本發明涉及源于擬南芥植物的小肽(基因ID號AT2G36440，命名為SSIP1)，其CDS序列和蛋白序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本發明經研究表明，SSIP1具有親脂性，與脂滴結合后可以移動，母系遺傳，即移動的小肽會累積在胚胎細胞，并可遺傳至下一代,具有導肽載體的潛在應用價值。

優選地，所述融合蛋白包括但不限于GFP。

本發明還提供一種導肽載體，該導肽載體包括SSIP1。

優選地，還包括脂質體。

進一步的，所述脂質體為脂質體2000。

具體的，所述脂質體為(20-50)％脂質體(即質量濃度百分數為20％-50％的脂質體)。更具體的，所述脂質體為25％脂質體。

本發明還提供上述的導肽載體在介導SSIP1的融合蛋白進入細胞中的應用。

SSIP1與脂結合后可與細胞膜融合并進入細胞，SSIP1具有母系遺傳的特點，即SSIP1會移動并累積于早期的胚胎細胞。根據此特點，將SSIP1及其融合蛋白包埋于脂質體后，可將與其融合的蛋白導入胚胎細胞。SSIP1可作為導肽載體，可快速引導目的蛋白進入胚胎細胞，該方法不涉及改變基因組即可以短暫改變一些農藝性狀。

本發明還提供上述導肽載體的制備方法，即將SSIP1預包埋于脂質體中。