[發明專利]一種間充質干細胞外泌體的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011285097.7
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112359013A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 陳海佳;王小燕;張占英;張夢晨
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司;廣州賽萊拉生物基因工程有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 蘇云輝

1.一種間充質干細胞外泌體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1:用完全培養基分別接種三批間充質干細胞培養液進行細胞融合，分別記為第一批、第二批和第三批；

在第一批間充質干細胞培養液中加入含有藥物溶液的基礎培養基進行饑餓培養，離心，收集第一上清液；

S2：在第二批間充質干細胞培養液中加入所述第一上清液進行饑餓培養，離心，收集第二上清液；

S3：在第三批間充質干細胞培養液中加入所述第二上清液進行饑餓培養，離心，收集上清液得到所述間充質干細胞外泌體；

所述藥物溶液的溶質為3,3’-二吲哚甲烷。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述藥物溶液的溶劑為二甲基亞砜；

所述藥物溶液的溶質在所述基礎培養基中的濃度為(40～60)μM。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第一批間充質干細胞培養液中的細胞密度為(5～6)×10⁴個細胞/mL，所述第二批間充質干細胞培養液中的細胞密度為(4～5)×10⁴個細胞/mL，所述第三批間充質干細胞培養液中的細胞密度為(3～4)×10⁴個細胞/mL。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第二批間充質干細胞培養液與所述第一上清液的體積比為1：(1～1.5)，所述第三批間充質干細胞培養液與所述第二上清液的體積比為1：(0.5～1)。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述完全培養基為含有10％FBS的DMEM/F12；

所述基礎培養基為無酚紅的1640培養基或無酚紅的MEMα培養基。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述細胞融合度為85％-95％。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，細胞融合之后，每一次進行饑餓培養之前，還進行：

用氯化鈉注射液清洗間充質干細胞培養液。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述饑餓培養的時間為24h，所述離心的離心力為800g-1000g，所述離心的時間為10-15min。

9.一種間充質干細胞外泌體，其特征在于，由權利要求1～8任意一項所述的制備方法制備得到。

10.3,3’-二吲哚甲烷在制備間充質干細胞外泌體中的應用。