[發明專利]一種椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用

在審

• 申請號: 202011284327.8
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112425611A
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 趙娜娜
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: A01N65/12
• 分類號: A01N65/12;A01P21/00;A01C1/00;A01C1/08;A01C1/04
• 代理公司: 北京精翰專利代理有限公司 11921
• 代理人: 劉曉暉

1.一種椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，所述應用包括如下步驟：

(1)椒蒿提取物的提取：椒蒿曬干剪碎后，依次用乙醇和水浸泡，旋轉蒸發器濃縮后得到乙醇浸提物，再用溶劑提取乙醇浸提物，旋轉蒸發器濃縮得到椒蒿提取物，2-6℃下保存備用；

(2)列當種子的表面消毒：選取適量的列當種子裝入離心管中，再加入適量2.1wt％的次氯酸鈉，振動搖勻，靜置至沉淀；去除混合液，在離心管中繼續加入蒸餾水沖洗2-4次；再加入酒精，振動搖勻，靜置至沉淀；去除上層液體，剩余列當種子繼續用蒸餾水沖洗2-4次后，倒在吸水紙上，晾干備用；

(3)預培養：在培養皿內鋪上雙層定性濾紙，加蒸餾水浸濕，在定性濾紙上放入多片玻璃纖維濾紙，將消毒過的列當種子均勻地撒在玻璃纖維濾紙片上，蓋上培養皿，封口膜密封培養皿，置于25℃的恒溫培養箱中暗培養4天；

(4)列當種子發芽實驗：稱取71.4mg椒蒿提取物于離心管中，加入甲醇溶液稀釋，打孔器將玻璃纖維濾紙打成直徑為8mm的濾紙片，稀釋后的椒蒿提取物將濾紙片浸濕，放置干燥，最后在培養皿中鋪上雙層定性濾紙，加入蒸餾水浸濕至不滴漏以保持培養皿內濕潤，將干燥后的玻璃纖維濾紙片放在定性濾紙上，在顯微鏡下挑選飽滿、大小一致的步驟(3)預培養后的列當種子，每個濾紙片上放25-30粒種子，蓋上培養皿，用Parafilm封口膜密封，置于25℃的恒溫培養箱中黑暗培養8天，觀察列當種子的發芽情況。

2.根據權利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，步驟(1)中，椒蒿曬干剪碎后，依次用體積分數為95％乙醇、75％乙醇、50％乙醇和水各浸泡48小時。

3.根據權利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，步驟(1)中，所述溶劑為正己烷、氯仿和乙酸乙酯中的一種。

4.根據權利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，步驟(1)中，得到的椒蒿提取物，收集放入棕色瓶中密封保存，置于4℃冰箱中備用。

5.根據權利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，步驟(2)中，列當種子的表面消毒，具體步驟為：選取適量的列當種子裝入5mL的離心管中，用移液槍向離心管中加入適量2.1wt％的次氯酸鈉，振動搖勻4min，靜置1min至沉淀；用移液槍吸出混合液，在離心管中繼續加入蒸餾水沖洗3次；再加入75％的酒精，振動搖勻4min，靜置1min至沉淀；移液槍吸去上層液體，剩余列當種子繼續用蒸餾水沖洗3次后，倒在吸水紙上，晾干備用。

6.根據權利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列當種子發芽中的應用，其特征在于，步驟(4)中，將椒蒿提取物加入甲醇溶液分別稀釋成濃度為7.14×10⁴g/mL、3.57×10³g/mL、178.5g/mL、8.93g/mL、0.45g/mL和0.022g/mL于六個離心管中。