[發(fā)明專利]新月彎孢霉甾體11β-羥化酶CYP5103B6突變體構(gòu)建及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011281730.5 | 申請(qǐng)日： | 2020-11-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112608909A | 公開（公告）日： | 2021-04-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉曉光;李金紅;路福平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 天津科技大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/02 | 分類號(hào)： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/81;C12P33/06;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 300457 天津市經(jīng)濟(jì)*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 新月 彎孢霉甾體 11 羥化酶 cyp5103b6 突變體 構(gòu)建 及其 應(yīng)用 | ||
1.C11β-羥化酶基因突變體L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，所述突變體的氨基酸序列是在如SEQ ID NO：1所示的序列基礎(chǔ)上進(jìn)行突變，即突變體L1的291位氨基酸由原來(lái)的蘇氨酸(ACC)突變成亮氨酸密碼(TAC)；突變體L2的365位氨基酸由原來(lái)的甲硫氨酸(ATG)突變成丙氨酸密碼(GCG)；突變體L3的372位氨基酸由原來(lái)的丙氨酸(GCC)突變成苯丙氨酸密碼(TTC)；突變體L4的291位、365位氨基酸共同突變，即T291Y/M365A；突變體L5的291位、372位氨基酸共同突變，即T291Y/A372F；突變體L6的365位、372位氨基酸共同突變，即M365A/A372F；突變體L7的291位、365位、372位氨基酸共同突變，即T291Y/M365A/A372F。
2.權(quán)利要求1所述的C11β-羥化酶基因突變體L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，用于工業(yè)轉(zhuǎn)化11-脫氧皮質(zhì)醇生產(chǎn)氫化可的松。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，C11β-羥化酶基因突變體L6、L7轉(zhuǎn)化甾體11-脫氧皮質(zhì)醇時(shí)羥化特異性提高，副產(chǎn)物明顯減少。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，重組表達(dá)載體或重組釀酒酵母宿主菌表達(dá)C11β-羥化酶突變體的應(yīng)用。
5.一種高效制備氫化可的松的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求4所述的重組釀酒酵母，發(fā)酵轉(zhuǎn)化底物11-脫氧皮質(zhì)醇并從發(fā)酵液萃取產(chǎn)物氫化可的松。
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