[發明專利]GnT-II基因下調表達作為肝癌預后標志物中的應用

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• 申請號: 202011280703.6
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112375810A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 陳紅松;陳冬波;陳譜;鄧康健;廖維甲;謝興旺
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明公開了GnT?II基因下調表達作為肝癌預后標志物中的應用。本發明利用CRISRP人全基因組編碼基因敲除文庫篩選到調節抑制性免疫檢查點分子CD155表達的編碼基因GNT?II，并發現在肝癌患者的腫瘤組織中GNT?II的表達與CD155的表達呈正相關；進一步地，GNT?II的表達與肝癌患者的預后明顯相關，即在早期男性肝癌患者中GNT?II的表達越高，患者的預后越差。因此GNT?II在肝癌中作為預后指標具有一定的潛在應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，涉及GnT-II基因下調表達作為肝癌預后標志物中的應用。

背景技術

肝癌是常見的惡性腫瘤，其病死率在所有惡性腫瘤中位居第二，嚴重威脅人類的生命和健康。肝癌常見的治療方案手術治療、靶向治療、經導管動脈化療栓塞和消融等治療對晚期肝癌的治療效果非常有限。近年來，免疫治療的出現給肝癌的治療提供了新的選擇，細胞免疫治療、細胞因子、腫瘤疫苗、溶瘤病毒以及免疫檢查點抑制劑等新興的免疫治療技術也逐步往臨床應用上推進，但是總體治療應答率仍非常有限。以免疫檢查點抑制劑藥物為代表的免疫治療，雖在多種實體瘤上的臨床試驗結果令人鼓舞，但在肝癌的臨床試驗結果表明，PD-1/PD-L1抗體單藥免疫治療和聯合CTLA-4抗體組并未能顯著改善肝癌患者的總體生存率。總體來看，肝癌目前的免疫治療的應答率尚未達到理想的療效。

近年來，多項研究表明TIGIT/CD155免疫檢測點信號通路也是腫瘤免疫逃逸的主要機制之一。TIGIT分子主要作為一種具有免疫抑制作用的協同刺激分子與CD155分子結合，從而對T細胞和NK細胞功能產生抑制，進而介導腫瘤免疫逃逸。CD155是Nectin樣分子家族中的第五成員，最初是作為脊髓灰質炎病毒受體被發現的，因此，CD155也被稱為nel-5或PVR。CD155作為免疫球蛋白樣的粘附分子，參與細胞的粘附與遷移，同時調節自然殺傷細胞和T細胞介導的免疫。CD155在各種正常人體組織中基本不表達或弱表達，但常在人類惡性腫瘤細胞中過度表達，促進腫瘤細胞侵襲和遷移，并與腫瘤進展和預后不良有關。目前針對CD155抗體單藥已經在黑色素瘤、膀胱癌、卵巢癌、腎細胞癌、乳腺癌等多個癌種中開展了臨床試驗(https://clinicaltrials.gov)。

有研究者已經證實肝癌組織中CD155的表達高于癌旁組織，且與肝癌分期、無病生存期(DFS)和總生存期時間(OS)有很強的相關性，在阻斷CD155表達后能夠逆轉NK細胞耗竭，使其恢復抗腫瘤活性(Sun H,et al.Hepatology,2019；70:168-183)；另有研究表明隨著肝癌分化程度的降低，肝癌患者癌組織中CD155表達也隨之升高，這都提示CD155可能在肝癌發生發展中發揮重要作用(Duan X,et al.Molecular medicine reports,2019；20:3773-3781)。盡管在肝癌腫瘤微環境內細胞表達的CD155具有關鍵作用，但對CD155調節的研究仍然有限。

CRISPR系統是存在于細菌綱和古細菌綱中的一種天然免疫系統，其全稱為“成簇規律間隔短回文重復序列”(Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats)，可以通過識別和剪切入侵病毒基因組中的特定核酸序列，進而清除病毒、保護細菌細胞。基于CRISPR系統的作用方式，科學家將其改造成高通量CRISPR文庫，它可以在全基因組水平進行編碼基因或者非編碼基因的功能性遺傳篩選，是迄今為止最為強大的正向遺傳性篩選工具。CRISPR基因敲除文庫可以敲除幾乎所有編碼基因或者非編碼基因，并對各種重要生物學過程中的關鍵基因進行高通量功能性篩選，為探索各種生命科學問題提供強大的工具。

發明內容

本發明的目的是提供GnT-II基因下調表達作為肝癌預后標志物中的應用。