[發(fā)明專利]一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011280428.8 | 申請日： | 2020-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN112385540B | 公開（公告）日： | 2021-11-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 尤麗莉;李東棟 | 申請（專利權(quán)）人： | 海南大學 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 海南盛億專利代理事務所(普通合伙) 46005 | 代理人： | 吳燕梅 |
| 地址： | 570228 海*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檳榔 花序 外植體 組織培養(yǎng) 快速 繁殖 方法 | ||
1.一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，它包括以下步驟：
S1.外植體的選擇：采集檳榔幼嫩花序，清洗消毒后作為外植體備用；所述的清洗消毒具體操作為：將檳榔幼嫩花序用流水沖洗30min，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺上用無菌水潤洗；先用75％的酒精浸泡5min，再用8％次氯酸鈉浸泡10～15min，最后用無菌水沖洗5～6次，放入無菌水中待用；
S2.誘導培養(yǎng)：將步驟S1消毒后的外植體接種至體細胞胚誘導培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)，獲得體細胞胚；其中，所述體細胞胚誘導培養(yǎng)基為Y3基本培養(yǎng)基+1～60mg/L毒莠定+60g/L蔗糖+2g/L植物凝膠、Y3基本培養(yǎng)基+1～60mg/L 2,4-D+60g/L蔗糖+2g/L植物凝膠或Y3基本培養(yǎng)基+1～60mg/L麥草畏+60g/L蔗糖+2g/L植物凝膠中的任意一種，培養(yǎng)基的pH值為5～6；
S3.增殖培養(yǎng)：將所得的體細胞胚轉(zhuǎn)移至增殖培養(yǎng)基中進行暗培養(yǎng)，所述增殖培養(yǎng)基為：Y3基本培養(yǎng)基+1～10mg/L 2,4-D+1～10mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+2g/L植物凝膠，培養(yǎng)基的pH值為5～6；
S4.萌發(fā)培養(yǎng)：將增殖培養(yǎng)的體細胞胚轉(zhuǎn)移至萌發(fā)培養(yǎng)基在光照條件下進行萌發(fā)培養(yǎng)，獲得完整的再生植株；其中，所述的萌發(fā)培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基+0.5～5mg/L TDZ+2g/L活性炭+30g/L蔗糖+2g/L植物凝膠，培養(yǎng)基的pH值為5～6；
S5.移栽：將萌發(fā)培養(yǎng)所得的生根完整的再生植株生長2～4片葉后移栽至栽培基質(zhì)中在噴霧系統(tǒng)下培養(yǎng)，所述栽培基質(zhì)為沙、土和有機肥料的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S2中所述暗培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為90～160天，培養(yǎng)溫度26±1℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S2中所述體細胞胚誘導培養(yǎng)基為：Y3基本培養(yǎng)基+50mg/L毒莠定+60g/L蔗糖+2g/L植物凝膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S3中所述暗培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為25～30天，培養(yǎng)溫度26±1℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S3中所述增殖培養(yǎng)基為：Y3基本培養(yǎng)基+2mg/L 2,4-D+2mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+2g/L植物凝膠。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S4中所述光照條件為：光照強度1000～3000Lx，光照時間16～18h/d。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S4中所述萌發(fā)培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為60～90天，培養(yǎng)溫度為26±1℃，每30天繼代一次。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S4中所述萌發(fā)培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基+2mg/L TDZ+2g/L活性炭+30g/L蔗糖+2g/L植物凝膠。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以檳榔花序為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟S5中所述沙、土和有機肥料的重量比為10:2:1。
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