[發明專利]Seroin蛋白的截短體及其應用

有效

• 申請號: 202011280285.0
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112375131B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 董照明;趙萍;夏慶友;諸鴻韜
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

本發明公開了Seroin蛋白的截短體及其應用，Seroin蛋白的截短體為Seroin1、Seroin2或Seroin3的N端或C端片段；截短后的多肽具有抗菌活性，能夠用于抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，通過截短大大縮短了蛋白質的分子量，從而降低了通過化學法合成多肽的成本與難度，與此前完整蛋白的生產技術，本發明具有生產成本低、活性高、穩定性強、簡便快捷等明顯優點。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及Seroin蛋白的截短體，還涉及該蛋白截短體的應用。

背景技術

家蠶(Bombyx mori)是鱗翅目昆蟲的典型代表，起源于中國，由原始的野桑蠶(Bombyx mandarina)經人為馴化而來，具有重要的農業和經濟意義(Sutherland et al.,2010)。作為一種完全變態昆蟲，家蠶在變態成蛹的過程中不進食也不運動，僅以繭包裹自身來抵御外界危害。構成蠶繭的蠶絲是一種外部紡成的纖維蛋白分泌物。蠶絲主要由絲素蛋白(fibroin)和絲膠蛋白(sericin)構成(向仲懷,2005)。通過質譜等分子生物學研究技術對蠶絲的組分進行研究分析，發現蠶絲中除絲素和絲膠外，還有許多低分子量蛋白質，主要包括各種蛋白酶抑制劑和seroin蛋白(Zhang et al.,2015,Dong et al.,2013)。Seroin蛋白是鱗翅目泌絲昆蟲所特有的一類蛋白，1998年，Zurovec等人在大蠟螟(Galleriamellorella)的絲中發現一種由中部絲腺和后部絲腺共同分泌合成的小分子絲蛋白seroin(Zurovec et al.,2013)。2001年在家蠶中也鑒定到了兩種seroin蛋白，同樣由中部絲腺和后部絲腺共同分泌，并將其命名為seroin1和seroin2，并通過后續研究發現，家蠶的seorin蛋白在細菌誘導后的蠶體中上調表達，進一步研究發現seroin蛋白對細菌具有較強的抑制活性，其中seroin1對革蘭氏陽性細菌藤黃微球菌的抑制活性較強，而seroin2對革蘭氏陰性細菌大腸桿菌和革蘭氏陽性細菌藤黃微球菌的抑制活性都很強(Nirmala et al.,2001,Singh et al.,2014)。近年來，通過搜索NCBI蛋白質序列庫，表達序列標簽(EST)庫和轉錄組數據庫，研究人員在分屬于13個鱗翅目家族的32個物種中，共鑒定到了64個seroin蛋白。其中，在家蠶中鑒定到了除seroin1和seroin2外的另一個seroin蛋白，將其命名為seroin3，三個seroin蛋白的分子量都在10kDa左右。通過比較不同seroin的序列，發現seroin蛋白的C端序列較為保守，而N端序列富含脯氨酸(Dong et al.,2016)。

Seroin蛋白具有的抗菌活性使其能夠作為一種天然防腐劑、抗菌劑，在農業、食品、醫藥、美容化妝品等多個領域都具有潛在的應用價值。解決大量合成制備seroin蛋白的方法是實現seroin蛋白應用的首要前提。目前人工制備蛋白質主要有兩種方法：基因工程合成法和化學合成法。此前對于seroin蛋白主要通過原核表達的方式，即基因工程合成法，獲得重組蛋白(Singh et al.,2014)。原核表達需要使用大腸桿菌(Escherichia coli)等細菌作為表達菌株，而seroin作為一類抑菌活性較強的蛋白，通過原核表達的方式來獲得其重組蛋白存在一個無法避免的問題：seroin蛋白對宿主具有毒性或生長抑制性。這一問題可能導致菌株生長緩慢甚至無法表達，或僅能表達折疊不完全、功能受限的重組蛋白。因此，通過原核表達來獲得seroin蛋白的方式具有很大的不確定性，無法保證生產效率、產物的產量和產物的活性?；瘜W合成法目前主要用于合成小于10kDa的小分子蛋白，但是對于10kDa以上的蛋白，合成成本高，且合成難度大，因此研究具有生物學活性的seroin截短片段對開發Seroin抗菌產品具有重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種Seroin蛋白的截短體；本發明的目的之二在于提供所述Seroin蛋白的截短體在制備抗菌劑中的應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：