[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)GFAP的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011279930.7
• 申請(qǐng)日: 2020-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN112485445B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉聰;鄭興華;李博飛;馮玉靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京美聯(lián)泰科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

1.一種磁微粒標(biāo)記的GFAP抗體溶液，其特征在于，由GFAP抗體磁微粒偶聯(lián)物和緩沖液9組成；

所述緩沖液9，由以下組分組成：Na₂HPO₄·12H₂O 5.8g/L、NaH₂PO₄ 0.58g/L、NaCl 9.0g/L、牛血清白蛋白34.5g/L、蔗糖110g/L、纖維素鹽或纖維素衍生物3.0g/L、明膠27.5 g/L；pH為6.2-8.0；

所述GFAP抗體磁微粒偶聯(lián)物的制備方法為：

(1)將磁微粒用緩沖液4清洗后，重懸至5mg/mL，得到磁微粒溶液；按磁微粒與抗體質(zhì)量比100:5的比例，向磁微粒溶液中加入GFAP抗體，得到混合液1；

（2）按緩沖液4與磁微粒體積質(zhì)量比100:5的比例，向混合液1中加入緩沖液4，室溫反應(yīng)10min，得到混合液2，按緩沖液5與磁微粒體積質(zhì)量比100:5的比例，向混合物2中加入緩沖液5，37℃反應(yīng)20小時(shí)，得到磁微粒偶聯(lián)物；

（3）用緩沖液6清洗磁微粒偶聯(lián)物，重懸至5mg/mL，37℃反應(yīng)20小時(shí)，用緩沖液8清洗磁微粒偶聯(lián)物，重懸至10mg/mL，即得所述GFAP抗體磁微粒偶聯(lián)物；

步驟（1）中所述磁微粒為甲苯磺酰基磁珠；

步驟（1）中所述緩沖液4，由以下組分組成： Na₂B₄O₇·10H₂O 8.5 g/L，pH為9.0-11.0；

步驟（2）中所述緩沖液5，由以下組分組成： K₂HPO₄ 500 g/L；pH為9.0-11.0；

步驟（3）中所述緩沖液6，由以下組分組成： Tris 7.8 g/L、NaCl 9.0 g/L、牛血清白蛋白6.5 g/L和吐溫20 12.5mL； pH為7.3-7.8；

步驟（3）中所述緩沖液8，由以下組分組成： Na₂HPO4·12H₂O 5.7 g/L、NaCl 9.0 g/L和牛血清白蛋白25.5g/L； pH為7.0-7.6。

2.一種檢測(cè)試劑條，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的磁微粒標(biāo)記的GFAP抗體溶液。

3.一種定量檢測(cè)GFAP的試劑盒，其特征在于，由權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑條、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和二維碼組成，其中，檢測(cè)試劑條由一系列溶液和附件組成一個(gè)整體，用于獨(dú)立檢測(cè)樣本；校準(zhǔn)品由兩個(gè)濃度的GFAP抗原和緩沖液配制而成，用于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線；質(zhì)控品由GFAP抗原和緩沖液配制而成；二維碼中錄入了當(dāng)批次的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

所述檢測(cè)試劑條包括試劑A、試劑B、清洗液和發(fā)光底物，其中，試劑A為堿性磷酸酶標(biāo)記的GFAP抗體溶液；試劑B為磁微粒標(biāo)記的GFAP抗體溶液；清洗液用于反應(yīng)過(guò)程的清洗；所述發(fā)光底物為ALP催化的發(fā)光底物。