[發(fā)明專利]一種基于核酸滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)的同時檢測多種生物標(biāo)志物的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011277365.0
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112557666B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)竹林
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南博奧瑞康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種基于核酸滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)的同時檢測多種生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒由4個獨(dú)立包裝的組分組成；

組分1包括標(biāo)記單鏈脫氧核糖核酸的特異性抗體溶液，每個所述生物標(biāo)志物標(biāo)記不同的單鏈脫氧核糖核酸；

組分2包括包被所述生物標(biāo)志物的特異性抗體的磁珠懸濁液；組分1中的特異性抗體與組分2中的特異性抗體不同，但互為配對，且能夠?qū)崿F(xiàn)對所述生物標(biāo)志物的雙抗夾心反應(yīng)；

組分3包括含有不同環(huán)狀脫氧核糖核酸的反應(yīng)液，所述環(huán)狀脫氧核糖核酸分別與組分1中的對應(yīng)的單鏈脫氧核糖核酸部分互補(bǔ)；

組分4包括含有不同探針的反應(yīng)液，所述探針中包括一個熒光基團(tuán)、一個脫嘌呤/脫嘧啶和一個淬滅基團(tuán)；

所述生物標(biāo)志物為檢測心血管疾病的生物標(biāo)志物，包括心肌肌鈣蛋白I?cTnI、肌紅蛋白Myo和肌酸激酶同工酶CKMB；

所述組分1的特異性抗體溶液中包括ssDNA1-cTnI?Ab1、ssDNA2-Myo?Ab1和ssDNA3-CKMB?Ab1；所述ssDNA1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，ssDNA2的核苷酸序列如SEQ?IDNO.2所示，ssDNA3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

組分2的磁珠懸濁液中包括Mb-cTnI?Ab2、Mb-Myo?Ab2和Mb-CKMB?Ab2；

組分3的反應(yīng)液中包括Circular?DNA1、Circular?DNA2、Circular?DNA3、DNA聚合酶、dNTP、MgAC₂、DTT和Tris?buffer；所述Circular?DNA1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示，Circular?DNA2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，Circular?DNA3的核苷酸序列如SEQID?NO.6所示；

組分4的反應(yīng)液中包括cTnI-FAM-AP-BHQ2、Myo-Cy3-AP-BHQ2、CKMB-Cy5-AP-BHQ2、Endonuclease?IV和buffer；所述cTnI-FAM-AP-BHQ2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示，所述Myo-Cy3-AP-BHQ2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，所述CKMB-Cy5-AP-BHQ2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述ssDNA1-cTnIAb1、ssDNA2-Myo?Ab1和ssDNA3-CKMB?Ab1的制備方法，包括：(1)分別合成5’端修飾DIBO基團(tuán)的ssDNA1、ssDNA2和ssDNA3，得DIBO-ssDNA1、DIBO-ssDNA2和DIBO-ssDNA3；

(2)分別對cTnIAb1、Myo?Ab1和CKMB?Ab1進(jìn)行重氮化處理，使抗體Fc片段上的糖鏈被修飾生成重氮基團(tuán)，得N3-cTnIAb1、N3-Myo?Ab1和N3-CKMB?Ab1；

(3)分別將所述DIBO-ssDNA1、DIBO-ssDNA2和DIBO-ssDNA3與N3-cTnI?Ab1、N3-Myo?Ab1和N3-CKMB?Ab1進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得所述ssDNA1-cTnIAb1、ssDNA2-MyoAb1和ssDNA3-CKMBAb1；

步驟(1)和步驟(2)不存在時間上的先后關(guān)系。