[發(fā)明專利]一種重組載脂蛋白E和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011272982.1
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112375138B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙忠顥;段念;任燕斌;米前芬;胥安慶
• 申請（專利權(quán)）人: 中元匯吉生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/775
• 分類號: C07K14/775;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;G01N1/28;G01N33/92;G01N33/68;G01N33/53;C12R1/19
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本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種重組載脂蛋白E(Apo E)和應(yīng)用，通過截短天然Apo E序列，使Apo E的性能得到提升，從而得到適用于Apo E檢測試劑盒中的質(zhì)控品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組載脂蛋白E和應(yīng)用。

背景技術(shù)

載脂蛋白E(Apo E)是一種多態(tài)性蛋白，參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過程，可與乳糜微粒、乳糜微粒殘體、極低密度脂蛋白(VLDL)和中密度脂蛋白(IDL)結(jié)合；血漿中的Apo E水平與心肌梗死、高脂蛋白血癥、動脈粥樣硬化等相關(guān)；而腦中的Apo E的水平則與老年癡呆癥和腦梗死等相關(guān)。且Apo E的濃度與血漿甘油三脂的含量有關(guān)，因此Apo E在人體中的含量可作為心腦血管疾病的重要指標(biāo)。

現(xiàn)有的Apo E的測定方法很多，包括：放射免疫測定法(RIA)、酶聯(lián)免疫測定法(ELISA)、乳膠凝集試驗和免疫比濁法、熒光免疫測定法等，基本都是通過抗原抗體結(jié)合的免疫手段進(jìn)行檢測，而Apo E免疫檢測試中通常需要Apo E抗原作為校準(zhǔn)質(zhì)控品，因此性能優(yōu)良的Apo E在Apo E的測定試劑盒中至關(guān)重要。

目前商業(yè)化檢測試劑盒中的Apo E為天然提取，并制成凍干粉，但是開瓶穩(wěn)定性差，復(fù)溶后4℃、24h活性下降約50％，檢測試劑盒質(zhì)量無法得到保證。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決天然Apo E抗原穩(wěn)定性差的問題，本發(fā)明提供一種重組Apo E，為Apo E檢測試劑盒開發(fā)提供質(zhì)量穩(wěn)定的校準(zhǔn)質(zhì)控品。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)手段：

一種重組載脂蛋白E(Apo E)，其是SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白。

一種多核苷酸，其選自編碼上述重組Apo E的多核苷酸；或與所述多核苷酸互補的互補多核苷酸。

優(yōu)選地，所述多核苷酸編碼SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種重組載體，所述重組載體包含所述的多核苷酸。

優(yōu)選地，所述重組載體的原始載體選自pGEX-4t-1、pColdI、pET-11a、pET-22b、pET-28a、pET-30c、pET-32a中的一種。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞含有所述載體，或宿主細(xì)胞的基因組中整合有所述的多核苷酸。

優(yōu)選地，所述宿主細(xì)胞為BL21(DE3)或BL21 PlysS(DE3)。

另一方面，本發(fā)明還提供一種儲存液，其特征在于，用于保存上述的重組載脂蛋白，包括10～50mM的緩沖液、2～10％的保護(hù)劑和0.1～10mM的還原劑，所述緩沖液選自PBS、Tris、MES、His或醋酸緩沖液；所述保護(hù)劑選自蔗糖或海藻糖。

本發(fā)明的Apo E序列中具有半胱氨酸，所以溶液中游離的蛋白會通過半胱氨酸中的巰基結(jié)合成二聚體，導(dǎo)致溶液狀態(tài)的質(zhì)控品不穩(wěn)定，還原劑的添加可以使蛋白保持單體結(jié)構(gòu)，不易變性，本發(fā)明儲存液中添加的還原劑可以為任意可溶的具有還原性的試劑。

儲存液中還原劑和糖類對蛋白結(jié)構(gòu)的影響不大，但三種溶質(zhì)的配比對儲存液的穩(wěn)定性有明顯的影響。

優(yōu)選地，還原劑選自β-巰基乙醇、TCEP(三-(2-甲酰乙基))膦鹽酸鹽或DTT(二硫蘇糖醇)。

本發(fā)明所述儲存液可以直接用來穩(wěn)定保存純化的重組Apo E，經(jīng)驗證，可以在-20℃～40℃條件下保存一個月，重組Apo E的性能不會改變，也可以將儲存液凍存，更長期的保存，且凍存的儲存液再次溶解，也可以在-20℃～40℃條件下保存一個月，性能并不會受影響。