[發(fā)明專利]一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011268535.9
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112315879B
• 公開（公告）日: 2022-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅彬相
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江顏雪化妝品有限公司
• 主分類號: A61K8/9794
• 分類號: A61K8/9794;A61K8/9789;A61K8/67;A61K8/64;A61K8/49;A61K8/34;A61Q7/00
• 代理公司: 蘇州蘇旺知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32477
• 代理人: 方昊佳

1.一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液，包括，黃芪提取物、干姜浸膏、維生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氫氧化鈉、乳酸；

所述黃芪提取物，提取自外植體毛狀根中，外植體為根、莖、葉；

所述外植體毛狀根，用發(fā)根農(nóng)桿菌對黃芪外植體進(jìn)行侵染：取莖段為外植體，培養(yǎng)基pH值為5-6，蔗糖濃度為2-5%，外植體齡為30-35D，超聲波處理時間4s，預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)2-3D，侵染時間為5-10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA；

所述發(fā)根農(nóng)桿菌為A4、15834、1025和1000菌株中的一種；

所述發(fā)根農(nóng)桿菌其Ri質(zhì)粒含有FGF-10基因，通過PCR擴(kuò)增FGF10基因，經(jīng)雙酶切后，連接到Ri質(zhì)粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液，其特征在于：按照質(zhì)量比黃芪提取物3-5份、干姜浸膏1-3份、維生素E 0.5-2份、甘油2-8份、氮酮0.8-3.5份、丙二醇0.4-3份、氫氧化鈉0.1-0.6份、乳酸0.5-4份。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液，其特征在于：按照質(zhì)量比黃芪提取物5份、干姜浸膏1.5份、維生素E 0.5份、甘油6份、氮酮1.2份、丙二醇1.5份、氫氧化鈉0.3份、乳酸1.6份。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液的制備方法，包括以下具體步驟：

步驟一：黃芪提取物的制備：取黃芪毛狀根洗凈，放入研缽中液氮研磨，加入去離子水?dāng)嚢杈鶆蚝箪o止3-5h，8000-12000rpm離心20-40min，取上清液得黃芪提取物；

步驟二：干姜浸膏的制備：取干姜粉，用90%乙醇作溶劑，浸漬24h后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集初漉液850ml，另器保存，繼續(xù)滲漉至漉液近無色、姜的香氣和辣味已淡薄為止，收集滲漉液，在60℃以下濃縮至稠膏狀，加入初漉液，混勻，濾過，靜置，待澄清，濾過，即得姜流浸膏；

步驟三：將10%甘油碾勻，加入純化水適量，待充分溶脹后，加入黃芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、維生素E、乳酸，攪拌均勻，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為5.5-6.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液的制備方法，其特征在于：所述黃芪毛狀根進(jìn)行PCR檢測：根據(jù)設(shè)計(jì)的一對FGF-10基因引物，在條帶627bp出現(xiàn)了與基因引物相同的條帶，而未轉(zhuǎn)化的黃芪外植體則沒有擴(kuò)增出條帶，證明農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒己經(jīng)整合進(jìn)毛狀根的基因組中。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種生物因子睫毛滋養(yǎng)液的制備方法，其特征在于：所述黃芪毛狀根轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大增殖培養(yǎng)：用MS液體培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30g/L，添加30μmol/L的JA，培養(yǎng)25-35D。