[發(fā)明專利]一種提取病毒核酸的試劑盒和提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011267557.3
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112251492A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設計）人: 楊廣宇;李梁;梁佳茗;王志耘
• 申請（專利權）人: 上海紳道生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 上海旭誠知識產(chǎn)權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發(fā)明提供了一種提取病毒核酸的試劑盒和提取方法。本發(fā)明第一方面提供了一種提取病毒核酸的試劑盒，包括裂解液、磁珠懸浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉劑溶液、洗滌液和洗脫液；其中，裂解液包括Tris?HCL、異硫氰酸胍、N?月桂酰肌氨酸鈉、EDTA、TritonX?100、CTAB和Antifoam 204；洗滌液包括Tris?HCL、PEG6000和氯化鈉；洗脫液為純水。本發(fā)明提供的試劑盒和提取方法提高了核酸的提取效果，而且可實現(xiàn)室溫下病毒核酸的提取，避免了加熱處理造成的基因污染，此外，還避免了乙醇對提取過程的影響，與常規(guī)磁珠法相比，提取時間可縮短至15min左右，提取過程更加快捷簡便。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學技術領域，尤其涉及一種病毒核酸提取試劑盒和提取方法。

背景技術

核酸提取技術是病毒分子生物學研究的基礎，現(xiàn)已廣泛應用于病原微生物檢測、臨床疾病診斷、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測以及法醫(yī)學鑒定等眾多領域。在提取過程中要遵循以下原則：提取盡可能充分，保證一級結構的完整性，避免蛋白質(zhì)、脂類物質(zhì)和多糖等生物大分子的污染，并且盡可能縮短和簡化提取流程。一種提取效率高、時間短、操作簡單的核酸提取試劑已成為快速分子診斷技術的關鍵。

目前，磁珠法技術越來越主導核酸提取市場，其主要原理是在磁珠上標記特異性吸附核酸的物質(zhì)來特異性吸附核酸，并通過磁分離技術將核酸從磁珠表面洗脫。具體包括裂解、吸附、洗滌、洗脫四個步驟，其中，裂解主要是通過異硫氰酸胍提取待測樣品的DNA/RNA，吸附通常是在磁力架上進行，利用改良和表面修飾后的磁珠吸附DNA/RNA，洗滌主要分三次進行，前兩次主要使用主成分為鹽酸胍和乙醇的buffer，用于去除蛋白雜質(zhì)，第三次主要使用主成分為乙醇的buffer去除鹽離子，洗滌后需要在通風處將磁珠晾干，晾干后使用Tris-HCL或水溶液對磁珠進行洗脫，現(xiàn)有的磁珠法存在較多的缺陷，例如，裂解過程一般需要在50-55℃下孵育15-20分鐘，期間間隔每5分鐘左右，需要顛倒3-4次，操作十分麻煩；晾干過程主要用于去除殘留乙醇，不僅耗費時間，而且操作不當容易導致乙醇殘留，影響PCR擴增速率；為了加速DNA/RNA的釋放和洗脫，通常在裂解和洗脫過程進行加熱處理，在加熱容易造成基因污染，造成假陽性的檢測結果；現(xiàn)有的磁珠法的整個提取時間需要40min左右，耗時太長，因此，本領域技術人員致力于開發(fā)一種病毒核酸提取試劑盒和提取方法，彌補現(xiàn)有缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于現(xiàn)有技術的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種提取效率高、時間短的提取病毒核酸的試劑盒和提取方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供了一種提取病毒核酸的試劑盒，所述試劑盒包括裂解液、磁珠懸浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉劑溶液、洗滌液和洗脫液；

其中，所述裂解液包括Tris-HCL、異硫氰酸胍、N-月桂酰肌氨酸鈉、EDTA、TritonX-100、CTAB和Antifoam 204，所述異硫氰酸胍的濃度為2-6M；

所述蛋白酶K溶解液包括蛋白酶K、甘油、乙酸鈉和氯化鈣；

所述洗滌液包括Tris-HCL、PEG6000和氯化鈉；

所述洗脫液為純水。

進一步地，所述裂解液中，Tris-HCL的濃度為30-60mM、N-月桂酰肌氨酸鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.05-2％、EDTA的濃度為5-10mM、TritonX-100的體積分數(shù)為1-3％、CTAB的質(zhì)量分數(shù)為0.1-1％、Antifoam 204的體積分數(shù)為0.1-1％，其中，所述Tris-HCL的pH為8.0-9.5。

進一步地，所述磁珠懸浮液中磁珠的濃度為20-50mg/mL。

進一步地，所述磁珠的粒徑為10-50nm。