[發明專利]一種檢測啶蟲脒的電化學傳感器

有效

• 申請號: 202011263843.2
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112378977B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 劉素;江龍;王玉;黃加棟;孫文玉;王業茹;張曼茹;張儒峰;李莎莎
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/53
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 牛芳

1.一種檢測啶蟲脒的電化學傳感器，其特征在于，包括檢測電極，Nb.BbvCI酶，Klenow聚合酶，血紅素，序列如SEQ ID NO: 1-4所示的T1鏈、T2鏈、P1鏈、P2鏈；所述檢測電極為表面修飾DT鏈、DW鏈和LP鏈的金電極，所述DT鏈、DW鏈和LP鏈序列如SEQ ID NO: 5-7所示，所述DT鏈的3’端和所述DW鏈的5’端修飾巰基。

2.一種利用如權利要求1所述的電化學傳感器檢測啶蟲脒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將DT鏈修飾到金電極表面；

（2）將DW鏈和LP鏈在緩沖溶液中雜交獲得DW-LP鏈，然后將DW-LP鏈修飾到步驟（1）獲得的金電極表面，獲得DNA修飾金電極；

（3）T1鏈和T2鏈在緩沖溶液雜交獲得T1-T2雜交鏈，將P1鏈、P2鏈和啶蟲脒的待測液或系列濃度標準溶液混合，于Nt.BbvCl酶和Klenow聚合酶催化下，在含dNTP的溶液中反應，獲得反應液；

（4）DNA修飾金電極表面滴加反應液與Nt.BbvCl酶反應，沖洗后再滴加血紅素孵育；然后以雙氧水為底物，以Ag/AgCl電極為參比電極、Pt電極為對電極，采用差分脈沖伏安法檢測信號；

（5）以系列濃度標準溶液中啶蟲脒濃度對數對電流大小作標準曲線，根據待測液電流大小計算待測液中啶蟲脒濃度。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（1）中修飾前還包括金電極預處理步驟：在0.3和0.05μm氧化鋁液漿中依次拋光，然后沖洗。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）和步驟（3）中，雜交溫度為37℃，雜交時間為30min。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述緩沖溶液為pH 7.4的PBS緩沖液；其為含有1mM MgCl₂和1mM CaCl₂的PBS緩沖液。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（4）中，差分脈沖伏安法參數設置為：電位0到-0.5V，脈沖寬度0.05V，掃描速率為0.06s。