[發明專利]一種甾醇在體外培養自然殺傷細胞促進其增殖方面的應用

在審

• 申請號: 202011263640.3
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112359017A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 南京奧賽斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種甾醇在體外培養自然殺傷細胞促進其增殖方面的應用，該甾醇為(3α,5α)?16?烯?3?甾醇。(3α,5α)?16?烯?3?甾醇孵育可以有效提高NK細胞的增殖活性，抑制其凋亡，且具有濃度依賴效應。因此，可以將(3α,5α)?16?烯?3?甾醇用于NK細胞體外培養，提高NK細胞的體外增殖活性，為過繼性NK細胞治療提供更多的效應細胞。(3α,5α)?16?烯?3?甾醇可以制備成體外培養NK細胞提高其增殖活性的培養基。

技術領域

本發明屬于細胞治療領域，涉及過繼性NK細胞治療，具體涉及一種甾醇在體外培養自然殺傷細胞促進其增殖方面的應用。

背景技術

NK細胞占外周血淋巴細胞總數的5％～15％，由造血干細胞發育而來，經歷最早前體NK細胞到前體NK細胞，逐漸發育為未成熟NK細胞，然后在物理接觸和骨髓基質中細胞因子環境誘導下，逐步發育為功能完整的成熟NK細胞，最后獲得細胞溶解潛力。

如何獲得足夠數量以及高質量的NK細胞用于臨床，是NK細胞過繼免疫治療應用于臨床所面臨的挑戰之一。NK細胞的發育和功能成熟受到多種細胞因子的調控。這些細胞因子單獨或組合在促進NK細胞的分化成熟、活化、增殖及細胞毒活性過程中發揮重要的作用。借助細胞因子刺激，可進一步擴增NK細胞數量及增強NK細胞功能，有助于為過繼性NK細胞治療創造更好的療效。

但是，單純細胞因子的刺激效果有限。越來越多的研究發現，很多小分子化合物或者多糖、多肽等大分子化合物都可以刺激NK細胞提高其增殖活性或/和殺傷力。

(3α,5α)-16-烯-3-甾醇為一種植物甾醇，CAS號為1153-51-1，化學結構如下：

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供(3α,5α)-16-烯-3-甾醇在體外培養自然殺傷細胞促進其增殖方面的應用，進而獲得更多可以用于過繼治療的NK細胞。

本發明目的通過下面的技術方案實現：

一種甾醇在體外培養自然殺傷細胞促進其增殖方面的應用，所述甾醇為(3α,5α)-16-烯-3-甾醇。

一種甾醇用于制備體外培養NK細胞提高其增殖活性的培養基的用途，所述甾醇為(3α,5α)-16-烯-3-甾醇。

有益效果：

本發明發現，(3α,5α)-16-烯-3-甾醇孵育可以有效提高NK細胞的增殖活性，抑制其凋亡，且具有濃度依賴效應。因此，可以將(3α,5α)-16-烯-3-甾醇用于NK細胞體外培養，提高NK細胞的體外增殖活性，為過繼性NK細胞治療提供更多的效應細胞。(3α,5α)-16-烯-3-甾醇可以制備成體外培養NK細胞提高其增殖活性的培養基。

附圖說明

圖1為0d和14dCD56⁺CD3^-細胞占總細胞比率；

圖2為不同處理NK細胞的增殖活性；

圖3為Westernblot結果。

具體實施方式

以下實施例是為了具體本發明的實質性技術內容，不能以下實施例記載的具體常規細節限定本發明的保護范圍。

一、實驗材料

人源NK細胞完全培養基的品牌為Procell，購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

(3α,5α)-16-烯-3-甾醇(CAS登錄號1153-51-1)購自上海源葉生物科技有限公司。

二、實驗方法

1、NK細胞的體外培養和純度鑒定