[發明專利]細胞株及其應用

有效

• 申請號: 202011262960.7
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112626118B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 張熙;彼得·愛德華·羅比;維基·庫瑪·潘迪;黃鵬;木蘭;張淑偉
• 申請（專利權）人: 清華-伯克利深圳學院籌備辦公室
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027;G01N21/64;C12Q1/02;A61K49/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉燚

本發明公開了細胞株及其應用。本發明的第一方面，提供重組質粒，該重組質粒包含熒光蛋白基因和熒光素酶基因。根據本發明實施例的重組質粒，至少具有如下有益效果：本發明實施例所構建的重組質粒在轉染細胞后，可以使細胞同時表達熒光蛋白和熒光素酶，從而使細胞具有體內、體外雙重標記的特性，既能夠對活體組織生長進行連續監測并進行定量分析，又能在離體的組織和體外共培養體系中標識靶細胞以便于準確的定性和定量。從而實現更加方便快捷、全面精確的監測。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其是涉及細胞株及其應用。

背景技術

肺癌是目前發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，非小細胞肺癌(Non-Small?CellLung?Cancer，NSCLC)是肺癌的常見類型，約占肺癌的80～85％。然而，NSCLC患者中超過半數在診斷時即為晚期，而且晚期NSCLC生存時間短，無法承受手術治療。傳統的化療和放療由于缺乏特異性，在取得療效的同時也往往給患者帶來較大的毒副作用。因此，針對不同分子遺傳學背景的群體或/和個體，根據其對藥物敏感性相關基因或基因群表達譜的差異，進行有選擇性的靶向治療，達到療效最優化、毒性最低化是突破NSCLC化療“瓶頸”的希望所在。

在對NSCLC靶向治療方法和靶向藥進行研究時，研究人員需要對肺癌發生發展機制、腫瘤微環境與腫瘤細胞間的關系及抗癌藥物療效等相關內容有深入的了解，而構建NSCLC動物模型是了解這些內容的重要手段。目前，常用的肺癌動物模型建模方法主要分為誘導法和移植法。誘導法包括鼻滴注致癌物誘導、肺穿刺致癌劑誘導、皮下注射誘導等。誘導法雖然在一定程度上更能反映肺癌在人體內的實際發生情況，但誘導成功率、致癌器官的特異性不太理想。移植法相對而言能夠克服這類問題，該方法將具備可移植性的肺癌細胞株直接植入動物體內，從而完成肺癌動物模型的構建。

為了更全面準確地對肺癌進行監測，對于構建得到的肺癌動物模型，研究人員需要在對活體肺癌組織生長進行連續監測和定量分析的同時，在離體的腫瘤組織及體外共培養體系中標識癌細胞以進行準確的定性和定量。然而，以往研究中構建模型所使用的一部分肺癌細胞株雖然能夠實現對體外腫瘤細胞的標記，卻難以對其進行活體示蹤；而另一部分肺癌細胞株盡管解決了在體監測問題，但需要特定底物才能檢測，且反應的時效性使其難以對離體的癌細胞作持續穩定的標記。因此，有必要提供一種具備持續穩定的活體示蹤和體外標記效果的細胞株。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種具備持續穩定的活體示蹤和體外標記效果的細胞株及其應用。

本發明的第一方面，提供重組質粒，該重組質粒包含熒光蛋白基因和熒光素酶基因。

根據本發明實施例的重組質粒，至少具有如下有益效果：

本發明實施例所構建的重組質粒在質粒載體上插入有熒光蛋白基因和熒光素酶基因，該重組質粒在轉染細胞后，可以使細胞同時表達熒光蛋白和熒光素酶，從而使細胞具有體內、體外雙重標記的特性，既能夠對活體組織生長進行連續監測并進行定量分析，又能在離體的組織和體外共培養體系中標識靶細胞以便于準確的定性和定量。從而實現更加方便快捷、全面精確的監測。

其中，熒光蛋白基因可以是任選的熒光蛋白的基因，例如可以是綠色熒光蛋白(Green?Fluorescent?Protein，GFP)、紅色熒光蛋白(Red?Fluorescent?Protein，RFP)、黃色熒光蛋白(Yellow?Fluorescent?Protein，YFP)的基因，另外也可以是增強綠色熒光蛋白(Enhanced?Green?Fluorescent?Protein，EGFP)以獲得更強的熒光效果。熒光素酶基因可以是任選的熒光素酶，例如可以是螢火蟲熒光素酶(Firefly?Luciferase，編碼基因luc)、海腎熒光素酶(Renilla?Luciferase，編碼基因Rluc)。

本發明的第二方面，提供宿主細胞，該宿主細胞轉入有上述的重組質粒。