[發明專利]一種快速采集牛膝多糖核磁共振碳譜的分析方法

有效

• 申請號: 202011261723.9
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112326711B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 王林;李煥勇;韓鳳仙
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 深圳余梅專利代理事務所(特殊普通合伙) 44519
• 代理人: 陳余才

本發明屬于分析測試實驗技術領域，具體涉及一種快速采集牛膝多糖核磁共振碳譜的分析方法。本發明從測試樣品的質量、氘代試劑及助溶劑的篩選、超聲處理時間、采樣溫度和采集時間等多個方面優化了牛膝多糖碳譜的檢測條件。與現有技術相比，本發明提供的測試方法可在相對短的時間內獲得清晰的信噪比較高的牛膝多糖樣品的核磁共振碳譜圖。本發明方法具有實驗材料易得、操作簡便等特點，同時充分提高了儀器測試效率，為牛膝多糖分子的結構表征和確證、進一步研究其潛在的藥用價值提供了基礎條件。

技術領域

本發明屬于分析測試實驗技術領域，具體涉及一種快速采集牛膝多糖核磁共振碳譜的分析方法。

背景技術

牛膝是一種常見的中藥，又名百倍、懷牛膝、雞膠骨，屬莧科，是多年生草本植物，它主要分布于我國四川、河南、河北及山東等地。牛膝多糖是一種生物活性多糖，一般從中藥牛膝的根部提取純化得到，是牛膝中一種含量豐富的活性成分。牛膝多糖作為一種重要的多糖藥物具有顯著的抗癌、抗炎、抗病毒、抗衰老等功能。牛膝多糖為禾本科型果聚糖，化學組成中主要包含葡萄糖、甘露糖、果糖等多個單糖組分。它通常包含下圖中的結構單元，分子量較大，一般在幾千甚至在幾萬以上。

碳原子構成了有機化合物的骨架，核磁共振碳譜對于未知物的結構確證和推導的功效不言而喻。核磁共振碳譜測定的是¹³C核，而在自然界中¹³C核同位素豐度只有1％，這是核磁碳譜采集不易的主要原因。牛膝多糖本身分子量較大特點及在常見溶劑中溶解度有限等局限性，使得用常規方法采集牛膝多糖核磁共振碳譜困難重重，甚至可能花費了很長的機時都得不到碳譜信號。因此，開發一種簡單易行的牛膝多糖核磁共振碳譜分析方法對其結構表征和藥理臨床應用研究具有積極意義。

發明內容

本發明目的在于提供一種快速采集牛膝多糖核磁共振碳譜的分析方法。本發明方法能實現生物活性大分子牛膝多糖碳譜的快速測定，進而為對牛膝多糖進行更加詳細的結構表征提供條件。具體包括以下步驟：

(1)測試樣品溶液制備：

稱取40～80mg牛膝多糖于5.0mL離心管中，然后加入1.0mL氘代試劑和10～30μL助溶劑，將所述離心管置于超聲儀中超聲處理5min以上，超聲功率為120W，得到測試樣品溶液；將測試樣品溶液轉移至核磁管中并密封，待上機測試用；

所述氘代試劑為氘代甲醇、氘代二甲基亞砜或氘代水；

所述助溶劑為氘代鹽酸、氘代乙酸、氘代三氟乙酸、氘代氫氧化鈉或氘代氫氧化鉀溶液；

(2)樣品上機測試：

將裝有測試樣品溶液的核磁管用無塵紙擦拭干凈后放入布魯克500M核磁共振波譜儀中，設置采樣溫度為20～50℃，采樣時間為60min以上；采樣結束后保存譜圖。

優選的，步驟(2)后還包括步驟(3)特征峰信噪比的計算：通過軟件計算牛膝多糖核磁共振碳譜特征峰的信噪比。

優選的，步驟(1)中，稱取50～65mg牛膝多糖于5.0mL離心管中。

優選的，步驟(1)中，超聲處理的時間為5～10min。

優選的，步驟(1)中，稱取50mg牛膝多糖于5.0mL離心管中，然后加入1.0mL氘代水和10μL氘代鹽酸。

優選的，步驟(1)中，稱取50mg牛膝多糖于5.0mL離心管中，然后加入1.0mL氘代水和15μL氘代乙酸。

優選的，步驟(1)中，稱取50mg牛膝多糖于5.0mL離心管中，然后加入1.0mL氘代水和15μL氘代氫氧化鈉。

優選的，步驟(1)中，稱取50mg牛膝多糖于5.0mL離心管中，然后加入1.0mL氘代水和20μL氘代三氟乙酸。