[發明專利]一種針對固體樣本進行全自動核酸提取的方法

在審

• 申請號: 202011261649.0
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112375756A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 張丹;熊槐;任其翾;謝文明;侯慶唐;夏冬景;何鳳琴
• 申請（專利權）人: 安徽森芃生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12M1/24;C12M1/12;C12M1/02;C12M1/00
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉培越

本發明公開了一種針對固體樣本進行全自動核酸提取的方法，用于解決現有的基于磁珠法的自動化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質去除的問題；本發明將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動化核酸提取儀的樣本區；機械臂將樣本放入加熱震蕩區，移液機械臂將試劑加入雙層裂解管，機械臂給內管加蓋加熱震蕩裂解；將樣本放入自動配平離心機，離心，含有核酸的溶液流入外管，固體雜質殘留在內管；機械臂丟棄內管，移液機械臂往外管中加入結合液，吹打混勻后將混合液轉移至吸附柱中，吸附柱底部為核酸吸附硅膠膜，機械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動配平離心機，實現了在儀器平臺上自動化去除不溶性固體雜質的目標。

技術領域

本發明涉及核酸提取技術領域，具體為一種針對固體樣本進行全自動核酸提取的方法。

背景技術

核酸作為遺傳信息的載體，位于真核細胞的細胞核、線粒體、葉綠體等細胞器內或原核細胞的細胞質內(病毒等無細胞結構的生命體除外)。多種與核酸相關的技術，都需要首先獲得純度較高的核酸溶液，即核酸提取，例如，醫學核酸檢測技術、法醫DNA物證鑒定技術、基因克隆技術等等。

核酸提取技術經歷了酚抽提法、堿裂解法、CTAB抽提法、硅珠法、磁珠法、硅膠膜法等技術的發展，近些年，隨著儀器設備的發展，基于磁珠法的自動化核酸提取儀逐漸得到了廣泛的應用。無論是哪一種核酸提取技術，都必須解決幾個問題，一是細胞裂解、二是核酸結合蛋白的去除、三是固體不溶性雜質的去除、四是可溶性雜質的去除，現有的基于磁珠法的自動化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質去除的問題，對于液體樣本或經消化裂解后可完全變成可溶性液體的固體樣本，可以實現全部提取步驟自動化操作，而對于固體樣本，則需要實驗人員手動對樣本進行裂解、離心去除固體雜質等操作。

發明內容

本發明的目的就在于為了解決現有的基于磁珠法的自動化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質去除的問題，而提出一種針對固體樣本進行全自動核酸提取的方法，實現了在儀器平臺上自動化去除不溶性固體雜質的目標。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：一種針對固體樣本進行全自動核酸提取的方法，包括以下步驟：

S1：將固體樣本裝入雙層裂解管中；

S2：將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動化核酸提取儀的樣本區；

S3：第一機械臂將樣本放入加熱震蕩區，移液機械臂將試劑加入雙層裂解管，第一機械臂給內管加蓋加熱震蕩裂解；

S4：將樣本放入自動配平離心機，離心，含有核酸的溶液流入外管，固體雜質殘留在內管；

S5：第一機械臂丟棄內管，移液機械臂往外管中加入結合液，吹打混勻后將混合液轉移至吸附柱中；

S6：第一機械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動配平離心機，離心；

S7：移液機械臂往吸附柱內加入漂洗液，離心；

S8：移液機械臂往吸附柱內再次加入漂洗液，離心，第一機械臂將吸附柱轉移至洗脫管中，第一機械臂將吸附管和洗脫管一起轉移至加熱震蕩區，50～70℃加熱2～3分鐘，往吸附柱內加入洗脫液，第一機械臂給吸附柱加蓋，50～70℃加熱2～3分鐘；

S9：第一機械臂將吸附管和洗脫管放入自動配平離心機，離心，然后第一機械臂將吸附管和洗脫管放入低溫保存區，完成核酸提取。

優選的，所述雙層裂解管包括外管和內管，所述內管頂部開設有凹槽，所述凹槽內設置有環形凸起，且環形凸起與內管內壁固定連接；

所述凹槽底部開設有放置槽，且凹槽與放置槽連通，所述放置槽內設置有疏水濾膜，且疏水濾膜與內管底部內壁固定連接；

所述內管下方設置有外管，且外管套接固定在內管外側，所述外管頂部開設有存儲槽，所述放置槽與存儲槽連通。