[發(fā)明專利]一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011261649.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN112375756A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張丹;熊槐;任其翾;謝文明;侯慶唐;夏冬景;何鳳琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽森芃生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12M1/24;C12M1/12;C12M1/02;C12M1/00
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉培越

本發(fā)明公開了一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法，用于解決現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題；本發(fā)明將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動(dòng)化核酸提取儀的樣本區(qū)；機(jī)械臂將樣本放入加熱震蕩區(qū)，移液機(jī)械臂將試劑加入雙層裂解管，機(jī)械臂給內(nèi)管加蓋加熱震蕩裂解；將樣本放入自動(dòng)配平離心機(jī)，離心，含有核酸的溶液流入外管，固體雜質(zhì)殘留在內(nèi)管；機(jī)械臂丟棄內(nèi)管，移液機(jī)械臂往外管中加入結(jié)合液，吹打混勻后將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中，吸附柱底部為核酸吸附硅膠膜，機(jī)械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動(dòng)配平離心機(jī)，實(shí)現(xiàn)了在儀器平臺(tái)上自動(dòng)化去除不溶性固體雜質(zhì)的目標(biāo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸提取技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法。

背景技術(shù)

核酸作為遺傳信息的載體，位于真核細(xì)胞的細(xì)胞核、線粒體、葉綠體等細(xì)胞器內(nèi)或原核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)(病毒等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生命體除外)。多種與核酸相關(guān)的技術(shù)，都需要首先獲得純度較高的核酸溶液，即核酸提取，例如，醫(yī)學(xué)核酸檢測(cè)技術(shù)、法醫(yī)DNA物證鑒定技術(shù)、基因克隆技術(shù)等等。

核酸提取技術(shù)經(jīng)歷了酚抽提法、堿裂解法、CTAB抽提法、硅珠法、磁珠法、硅膠膜法等技術(shù)的發(fā)展，近些年，隨著儀器設(shè)備的發(fā)展，基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀逐漸得到了廣泛的應(yīng)用。無論是哪一種核酸提取技術(shù)，都必須解決幾個(gè)問題，一是細(xì)胞裂解、二是核酸結(jié)合蛋白的去除、三是固體不溶性雜質(zhì)的去除、四是可溶性雜質(zhì)的去除，現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題，對(duì)于液體樣本或經(jīng)消化裂解后可完全變成可溶性液體的固體樣本，可以實(shí)現(xiàn)全部提取步驟自動(dòng)化操作，而對(duì)于固體樣本，則需要實(shí)驗(yàn)人員手動(dòng)對(duì)樣本進(jìn)行裂解、離心去除固體雜質(zhì)等操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于為了解決現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題，而提出一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法，實(shí)現(xiàn)了在儀器平臺(tái)上自動(dòng)化去除不溶性固體雜質(zhì)的目標(biāo)。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法，包括以下步驟：

S1：將固體樣本裝入雙層裂解管中；

S2：將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動(dòng)化核酸提取儀的樣本區(qū)；

S3：第一機(jī)械臂將樣本放入加熱震蕩區(qū)，移液機(jī)械臂將試劑加入雙層裂解管，第一機(jī)械臂給內(nèi)管加蓋加熱震蕩裂解；

S4：將樣本放入自動(dòng)配平離心機(jī)，離心，含有核酸的溶液流入外管，固體雜質(zhì)殘留在內(nèi)管；

S5：第一機(jī)械臂丟棄內(nèi)管，移液機(jī)械臂往外管中加入結(jié)合液，吹打混勻后將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中；

S6：第一機(jī)械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動(dòng)配平離心機(jī)，離心；

S7：移液機(jī)械臂往吸附柱內(nèi)加入漂洗液，離心；

S8：移液機(jī)械臂往吸附柱內(nèi)再次加入漂洗液，離心，第一機(jī)械臂將吸附柱轉(zhuǎn)移至洗脫管中，第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管一起轉(zhuǎn)移至加熱震蕩區(qū)，50～70℃加熱2～3分鐘，往吸附柱內(nèi)加入洗脫液，第一機(jī)械臂給吸附柱加蓋，50～70℃加熱2～3分鐘；

S9：第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管放入自動(dòng)配平離心機(jī)，離心，然后第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管放入低溫保存區(qū)，完成核酸提取。

優(yōu)選的，所述雙層裂解管包括外管和內(nèi)管，所述內(nèi)管頂部開設(shè)有凹槽，所述凹槽內(nèi)設(shè)置有環(huán)形凸起，且環(huán)形凸起與內(nèi)管內(nèi)壁固定連接；

所述凹槽底部開設(shè)有放置槽，且凹槽與放置槽連通，所述放置槽內(nèi)設(shè)置有疏水濾膜，且疏水濾膜與內(nèi)管底部?jī)?nèi)壁固定連接；

所述內(nèi)管下方設(shè)置有外管，且外管套接固定在內(nèi)管外側(cè)，所述外管頂部開設(shè)有存儲(chǔ)槽，所述放置槽與存儲(chǔ)槽連通。