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[發(fā)明專利]一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法在審

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 202011261649.0 申請(qǐng)日: 2020-11-12
公開(公告)號(hào): CN112375756A 公開(公告)日: 2021-02-19
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 張丹;熊槐;任其翾;謝文明;侯慶唐;夏冬景;何鳳琴 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 安徽森芃生物科技有限責(zé)任公司
主分類號(hào): C12N15/10 分類號(hào): C12N15/10;C12M1/24;C12M1/12;C12M1/02;C12M1/00
代理公司: 合肥正則元起專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34160 代理人: 劉培越
地址: 230011 安徽省合肥*** 國(guó)省代碼: 安徽;34
權(quán)利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 針對(duì) 固體 樣本 進(jìn)行 全自動(dòng) 核酸 提取 方法
【說明書】:

發(fā)明公開了一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法,用于解決現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題;本發(fā)明將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動(dòng)化核酸提取儀的樣本區(qū);機(jī)械臂將樣本放入加熱震蕩區(qū),移液機(jī)械臂將試劑加入雙層裂解管,機(jī)械臂給內(nèi)管加蓋加熱震蕩裂解;將樣本放入自動(dòng)配平離心機(jī),離心,含有核酸的溶液流入外管,固體雜質(zhì)殘留在內(nèi)管;機(jī)械臂丟棄內(nèi)管,移液機(jī)械臂往外管中加入結(jié)合液,吹打混勻后將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中,吸附柱底部為核酸吸附硅膠膜,機(jī)械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動(dòng)配平離心機(jī),實(shí)現(xiàn)了在儀器平臺(tái)上自動(dòng)化去除不溶性固體雜質(zhì)的目標(biāo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸提取技術(shù)領(lǐng)域,具體為一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法。

背景技術(shù)

核酸作為遺傳信息的載體,位于真核細(xì)胞的細(xì)胞核、線粒體、葉綠體等細(xì)胞器內(nèi)或原核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)(病毒等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生命體除外)。多種與核酸相關(guān)的技術(shù),都需要首先獲得純度較高的核酸溶液,即核酸提取,例如,醫(yī)學(xué)核酸檢測(cè)技術(shù)、法醫(yī)DNA物證鑒定技術(shù)、基因克隆技術(shù)等等。

核酸提取技術(shù)經(jīng)歷了酚抽提法、堿裂解法、CTAB抽提法、硅珠法、磁珠法、硅膠膜法等技術(shù)的發(fā)展,近些年,隨著儀器設(shè)備的發(fā)展,基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀逐漸得到了廣泛的應(yīng)用。無論是哪一種核酸提取技術(shù),都必須解決幾個(gè)問題,一是細(xì)胞裂解、二是核酸結(jié)合蛋白的去除、三是固體不溶性雜質(zhì)的去除、四是可溶性雜質(zhì)的去除,現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題,對(duì)于液體樣本或經(jīng)消化裂解后可完全變成可溶性液體的固體樣本,可以實(shí)現(xiàn)全部提取步驟自動(dòng)化操作,而對(duì)于固體樣本,則需要實(shí)驗(yàn)人員手動(dòng)對(duì)樣本進(jìn)行裂解、離心去除固體雜質(zhì)等操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于為了解決現(xiàn)有的基于磁珠法的自動(dòng)化核酸提取儀沒有很好地解決固體不溶性雜質(zhì)去除的問題,而提出一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法,實(shí)現(xiàn)了在儀器平臺(tái)上自動(dòng)化去除不溶性固體雜質(zhì)的目標(biāo)。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種針對(duì)固體樣本進(jìn)行全自動(dòng)核酸提取的方法,包括以下步驟:

S1:將固體樣本裝入雙層裂解管中;

S2:將裝有固體樣本的雙層裂解管放入自動(dòng)化核酸提取儀的樣本區(qū);

S3:第一機(jī)械臂將樣本放入加熱震蕩區(qū),移液機(jī)械臂將試劑加入雙層裂解管,第一機(jī)械臂給內(nèi)管加蓋加熱震蕩裂解;

S4:將樣本放入自動(dòng)配平離心機(jī),離心,含有核酸的溶液流入外管,固體雜質(zhì)殘留在內(nèi)管;

S5:第一機(jī)械臂丟棄內(nèi)管,移液機(jī)械臂往外管中加入結(jié)合液,吹打混勻后將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中;

S6:第一機(jī)械臂將吸附柱和廢液槽一起放入自動(dòng)配平離心機(jī),離心;

S7:移液機(jī)械臂往吸附柱內(nèi)加入漂洗液,離心;

S8:移液機(jī)械臂往吸附柱內(nèi)再次加入漂洗液,離心,第一機(jī)械臂將吸附柱轉(zhuǎn)移至洗脫管中,第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管一起轉(zhuǎn)移至加熱震蕩區(qū),50~70℃加熱2~3分鐘,往吸附柱內(nèi)加入洗脫液,第一機(jī)械臂給吸附柱加蓋,50~70℃加熱2~3分鐘;

S9:第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管放入自動(dòng)配平離心機(jī),離心,然后第一機(jī)械臂將吸附管和洗脫管放入低溫保存區(qū),完成核酸提取。

優(yōu)選的,所述雙層裂解管包括外管和內(nèi)管,所述內(nèi)管頂部開設(shè)有凹槽,所述凹槽內(nèi)設(shè)置有環(huán)形凸起,且環(huán)形凸起與內(nèi)管內(nèi)壁固定連接;

所述凹槽底部開設(shè)有放置槽,且凹槽與放置槽連通,所述放置槽內(nèi)設(shè)置有疏水濾膜,且疏水濾膜與內(nèi)管底部?jī)?nèi)壁固定連接;

所述內(nèi)管下方設(shè)置有外管,且外管套接固定在內(nèi)管外側(cè),所述外管頂部開設(shè)有存儲(chǔ)槽,所述放置槽與存儲(chǔ)槽連通。

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