[發(fā)明專利]一種游離RNA助沉劑

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011261598.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN112410402A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鹿亞超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 麥凱（上海）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/6851
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯;宋纓

本發(fā)明涉及一種游離RNA助沉劑，每1ml助沉劑包括如下組分：5?10mg硫酸葡聚糖，0.01?0.02mg線性丙烯酰胺和0.1?0.2mmol醋酸鹽。本發(fā)明所提供的游離RNA助沉劑，能加速cfRNA提取過程中的沉淀，提高最終的游離RNA的提取得率；另外，本發(fā)明所述助沉劑使用方便，只需添加到現(xiàn)有的RNA提取試劑盒，就可明顯提高樣本中游離RNA的提取率，對(duì)后續(xù)下游分子生物學(xué)應(yīng)用無不利影響，如RT?PCR、qRT?PCR等，具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于游離RNA提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種游離RNA助沉劑。

背景技術(shù)

RNA是相對(duì)不穩(wěn)定的分子，容易被核糖核酸酶降解。cfRNA包括人體細(xì)胞程序性死亡過程釋放在循環(huán)里的RNA，mRNA、miRNAs、tRNAs、YRNA、circRNAs、piRNAs、rRNA、snRNA。據(jù)報(bào)道，來自食物和人體微生物群的外源性細(xì)胞外RNA也可以進(jìn)入循環(huán)，研究已證實(shí)cfRNA可以作為包括癌癥在內(nèi)的各種疾病的生物標(biāo)志物。而絕大多數(shù)的患者cfRNA含量非常低，給后續(xù)的檢測(cè)帶來很大挑戰(zhàn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種游離RNA助沉劑，用于加速cfRNA提取過程中的沉淀，提高最終的cfRNA的提取得率。

本發(fā)明提供了一種游離RNA助沉劑，每1ml助沉劑包括如下組分：5-10mg硫酸葡聚糖，0.01-0.02mg線性丙烯酰胺和0.1-0.2mmol醋酸鹽。

所述醋酸鹽為醋酸銨或醋酸鉀。

所述助沉劑貯存于-10℃-20℃的試管中。

本發(fā)明還提供了一種游離RNA助沉劑的應(yīng)用。

所述助沉劑用于體液樣本游離RNA的提取。

所述體液包括血漿、血清、胸水、腹水、腦脊液或尿液。

所述助沉劑用于分子生物學(xué)下游試驗(yàn)的提取樣本步驟，如RT-PCR或qRT-PCR等。

有益效果

與現(xiàn)有技術(shù)相比，使用本發(fā)明所提供的助沉劑，能夠有效的加速體液樣本游離RNA提取時(shí)游離RNA的沉淀，能夠明顯提高游離RNA的提取得率，進(jìn)而可以提高樣本中游離RNA相關(guān)疾病生物標(biāo)志物的檢出率；另外，本發(fā)明所述助沉劑使用方便，只需添加到現(xiàn)有的RNA提取試劑盒，就可明顯提高樣本中游離RNA的提取率，應(yīng)用范圍廣泛。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的Ct值判斷檢測(cè)結(jié)果。

圖2為實(shí)施例2的Ct值判斷檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供的一種游離RNA助沉劑，由如下組分組成：5mg/ml硫酸葡聚糖，0.01mg/ml線性丙烯酰胺和0.1mg/ml醋酸鹽。

正常人血清樣本TRIzol試劑法cfRNA抽提，用一步法qRT-PCR法檢測(cè)管家基因GAPDH CT值比較加入與不加入cfRNA助沉劑的效果。

1、核酸提取：

1)取0.5ml血清，加入1mlTRIzol試劑，混勻，室溫放置5-10min。

2)加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15s，靜置2min。