[發(fā)明專利]GmPIN1基因突變調(diào)控大豆結(jié)瘤和密植的方法及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011261356.2 | 申請日： | 2020-11-12 |
| 公開（公告）號： | CN112501179B | 公開（公告）日： | 2022-05-24 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陳栩;崔原原;柯美玉;高震;黃來妹;陳嬌梅 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建農(nóng)林大學 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 廈門智慧呈睿知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 35222 | 代理人： | 楊唯 |
| 地址： | 350000 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | gmpin1 基因突變 調(diào)控 大豆 密植 方法 及其 應用 | ||
1.GmPIN1基因突變調(diào)控大豆結(jié)瘤和密植的方法，其特征在于，使大豆植株GmPIN1中的三個同源基因GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c發(fā)生突變，獲得大豆三突變體Gmpin1abc；具體為：
GmPIN1a基因核酸序列如SEQ ID No.1所示，使GmPIN1a第2513-2541個核苷酸間的核苷酸序列發(fā)生缺失；GmPIN1b基因核酸序列如SEQ ID No.2所示，使GmPIN1b第2589-2617個核苷酸間的核苷酸序列發(fā)生缺失；GmPIN1c基因核酸序列如SEQ ID No.3所示，使GmPIN1c第3254-3282個核苷酸間的核苷酸序列發(fā)生缺失。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GmPIN1基因變異調(diào)控大豆結(jié)瘤和密植的方法，其特征在于，采用基因敲除方式使GmPIN1中的三個同源基因GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c同時出現(xiàn)堿基缺失，使蛋白提前終止。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的GmPIN1基因變異調(diào)控大豆結(jié)瘤和密植的方法，其特征在于，大豆三突變體Gmpin1abc通過下列方法獲得：
S1：設計構(gòu)建同時靶向GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c三個基因的sgRNA；
S2：利用退火反應獲得雙鏈寡核苷酸；
S3：利用BsaI核酸內(nèi)切酶線性化pEF1A2載體； S4：利用T4連接酶將S2和S3所獲得的產(chǎn)物連接在一起； S5：將S4所獲得的質(zhì)粒載體導入到GV3101農(nóng)桿菌中； S6：利用S5所獲得的農(nóng)桿菌用于侵染大豆； S7：將步驟S6所獲得的產(chǎn)物進行植物組織培養(yǎng)；
S8：對S7所獲得的組培苗進行植物抗性篩選，從而獲得不含CRISPR/Cas9載體片段的穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因大豆。
4.如權(quán)利要求1-3任意一項GmPIN1基因突變調(diào)控大豆結(jié)瘤和密植的方法的應用，其特征在于，應用于大豆及其相關株型中結(jié)瘤數(shù)目側(cè)枝夾角的調(diào)節(jié)。
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