[發明專利]一種9羥基雄烯二酮的制備方法

在審

• 申請號: 202011260933.6
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112359087A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 楊芳;唐杰;劉喜榮;孟浩;曾春玲;趙小娟
• 申請（專利權）人: 湖南新合新生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12R1/34
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 曾志鵬

本發明涉及一種9羥基雄烯二酮的制備方法，包括如下步驟，1)將植物甾醇、二氯甲烷和四甲基哌啶氮氧化物混合，攪拌，得到原料體系；控制溫度為10?20℃，將溴化鈉和碳酸氫鈉混合物水溶液滴加到上述原料體系中，滴加完畢后，滴加次氯酸鈉溶液，反應完全后，終止反應，處理，得到植物甾醇中間體；所述植物甾醇為菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β?谷甾醇，2)將植物甾醇中間體在恥垢分枝桿菌Mycobacterium smegmatis作用下進行生物轉化，得到9羥基雄烯二酮，恥垢分枝桿菌的保藏編號為CCTCC NO:M2013544；本發明能加快生物轉化速度，提高經濟效益。

技術領域

本發明屬于甾體激素藥物制備技術領域，具體涉及一種9羥基雄烯二酮的制備方法。

背景技術

植物甾醇中間體的結構式為：

其是通過植物甾醇氧化得到，植物甾醇為常用的甾體激素的原料，植物甾醇中間體為多種甾體激素的關鍵中間體，包括雄烯二酮等等，因此一種簡單，收率高純度好的植物甾醇中間體制備方法為研究者需要解決的問題。

目前的植物甾醇中間體的制備方法中，一般采用植物甾醇為起始原料，異丙醇鋁為氧化劑，在甲苯或二甲苯溶劑中，在丙酮存在下，于80℃左右，反應得到。反應溫度較高，收率為80％左右。這種方法需要高溫，會產生焦油，后處理麻煩。

專利申請號為201310628652.5的專利公開了一種9-OH-AD的制備方法，其采用恥垢分枝桿菌直接發酵植物甾醇得到。發酵時間較長，一般需要5天左右才能反應完全，發酵速度較慢，導致成本較高。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種9羥基雄烯二酮的制備方法，加快生物轉化速度，提高經濟效益。

本發明的內容為一種9羥基雄烯二酮的制備方法，包括如下步驟，

1)將植物甾醇、二氯甲烷和四甲基哌啶氮氧化物混合，攪拌，得到原料體系；控制溫度為10-20℃，將溴化鈉和碳酸氫鈉混合物水溶液滴加到上述原料體系中，滴加完畢后，滴加次氯酸鈉溶液，反應完全后，終止反應，處理，得到植物甾醇中間體；所述植物甾醇為菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β-谷甾醇，植物甾醇中間體的結構式為：

R為

2)將植物甾醇中間體在恥垢分枝桿菌Mycobacterium smegmatis作用下進行生物轉化，得到9羥基雄烯二酮，恥垢分枝桿菌Mycobacterium smegmatis的保藏編號為CCTCCNO:M2013544。

具體的反應路線為：

起始原料為菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β-谷甾醇。

植物甾醇和二氯甲烷的重量體積比為1g:(3-4)ml。植物甾醇和四甲基哌啶氮氧化物的重量比為1:0.01。

溴化鈉和碳酸氫鈉混合物水溶液中，溴化鈉的重量濃度為10％，碳酸氫鈉的重量濃度為3％。

次氯酸鈉溶液的濃度為10％。

植物甾醇和次氯酸鈉溶液的重量比為1:3。

終止反應的方式為，加入硫代硫酸鈉水溶液。

植物甾醇中間體在恥垢分枝桿菌Mycobacterium smegmatis作用下進行生物轉化的步驟為，將恥垢分枝桿菌接種到轉化培養基中，轉化完全后，處理，得到9羥基雄烯二酮；所述轉化培養基重量配方為，植物甾醇中間體2-4％，大豆油15-20％，玉米漿5-8％，硝酸鈉5-6％，磷酸氫二銨0.05-0.08％，pH為8。