[發明專利]一種珠星三塊魚特異性DNA分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202011260450.6
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112280871B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 常玉梅;梁利群;趙雪飛;孫博;張立民
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黑龍江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;A01K61/10
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

本發明提供了一種珠星三塊魚特異性DNA分子標記、DNA條形碼及珠星三塊魚種質快速鑒定和提純的方法。針對目前已經出現的珠星三塊魚種質混雜問題，本發明通過表型篩選、DNA條形碼篩選及珠星三塊魚特異性DNA分子標記篩選鑒定，最終篩選出穩定的珠星三塊魚種質資源。本發明所述的珠星三塊魚種質快速提純的方法操作簡單、準確性高、周期短、穩定性好、且種質純度高，為種質保護、合理利用及種質生物多樣性提供了技術支持。

技術領域

本發明涉及一種魚類種質提純方法，具體涉及一種珠星三塊魚特異性DNA分子標記及其品種鑒定和種質快速提純的方法。

背景技術

三塊魚(Tribolodon)是鯉形目、鯉科、雅羅魚亞科三塊魚屬幾種土著經濟種的統稱，主要分布于太平洋西北部的日本海及一些內陸淡水河流，是唯一降海洄游的鯉科魚類。在我國僅分布于綏芬河和圖們江流域。三塊魚是傳統的名貴珍稀魚類，肉質細嫩、肉味鮮美，肉中蛋氨酸和賴氨酸等人體必需氨基酸含量比一般魚類高，含有豐富的不飽和脂肪酸和維生素A、維生素D等。研究證明，三塊魚體內含有一種多糖黏蛋白質，有促進細胞發育、提高機體免疫力、降低膽固醇、防止動脈硬化和冠心病的功能，對代謝性疾病、身體虛弱等也有較好療效。歷史上，三塊魚與興凱湖的大白魚和烏蘇里江的鮭魚并稱為“邊塞三珍”。

近年來，由于水域環境遭到破壞，加之污染和酷捕濫撈等多種自然和人為因素，三塊魚資源瀕臨枯竭。為了增加三塊魚的野生種群數量，我國東寧縣鮭魚孵化放流站(綏芬河)從1989年開始每年通過捕撈洄游產卵群體，通過人工繁殖、放流，補充三塊魚野生資源。三塊魚每年4-6月份由日本海分批溯河到我國綏芬河產卵，當地漁民根據洄游群體的婚姻色和洄游時間將其分為“金灘頭”、“銀灘頭”和“黑灘頭”3種。但是解剖學、同工酶、線粒體DNA和核DNA分子標記等越來越多的證據證實溯河到我國綏芬河產卵的三塊魚只有2種，分別為俗稱金灘頭的珠星三塊魚(T.hakonensis)和俗稱黑灘頭的三塊魚(T.brandtii)。

珠星三塊魚和三塊魚兩種魚類形態相似，只有性成熟(4齡可達到性成熟)洄游產卵時其婚姻色，即體側“紅線”的分布和數量存在明顯差異，因此可依據婚姻色進行分類判定。珠星三塊魚體側表現為3條紅線，而三塊魚在側線下鱗靠近腹部有1條紅線，還有很多個體的“紅線”表型特征介于“二者”之間或不具備“紅線”特征，不易判別。利用表型鑒定和分子標記檢測發現，珠星三塊魚種質混雜嚴重，一些個體表型和基因組都出現了三塊魚特有的表型特征和基因痕跡。早期，日本學者Miura?Masao和OkataAhihiro對珠星三塊魚和三塊魚兩個物種早期發育進行了系統的形態學研究，利用載黑素細胞在體節不同位置區分這兩個物種魚苗(Masao?and?Ahihiro.1995.A?study?on?morphological?disrimationbetween?Triobolodonbrandtii?and?T.hakonensis?at?the?early?developmentstages.45:103-109.)。但此方法在實踐操作中不易掌握，需要對相同發育時間上的不同種幼魚進行細致的觀察比較，篩選周期也較長。專利CN107365872B提供了一種利用微衛星引物SSR-1和SSR-2鑒定綏芬河三塊魚不同洄游群體的方法，可區分珠星三塊魚、三塊魚或二者的雜交。專利CN109439762A則提供了一種更為簡化的分子標記引物對A8和A11，用于鑒定珠星雅羅魚(珠星三塊魚)和三塊魚。

DNA序列輔助分類作為一個理想的輔助形態學分類手段，迄今已有30多年歷史。2003年，Herbert首次提出DNA條形碼(DNA?barcoding)定義，即通過使用短的、標準化的基因片段來進行物種鑒定，以提高真核生物識別的效率，同時使得DNA序列輔助分類方法得到一定程度的統一，加快發展進程。目前，DNA條形碼技術已經成為一個被廣泛接受的物種鑒定工具，它重點強調了標準化和數據驗證，亦被稱為DNA分類學。目前，線粒體細胞色素C氧化酶亞基I(COI)基因是動物DNA條形碼研究中使用最為廣泛的標準基因，因為它具有：(1)適中的序列變異程度；(2)變異區域兩端的序列高度保守；(3)序列長度適宜等特點。這一結論在許多魚類、昆蟲和鳥類等動物中均得到很好驗證，但對于珠星三塊魚的研究尚未空白。