[發明專利]MrgD免疫抗原片段、MrgD抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011259592.0
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112409473B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 李鵬;吳曉光;趙錕;毛宇康;孔祥清
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫院（南京醫科大學第一附屬醫院）
• 主分類號: C07K14/72
• 分類號: C07K14/72;C07K16/28;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577
• 代理公司: 南京禾易知識產權代理有限公司 32320
• 代理人: 王彩君

本發明涉及抗體制備及其應用領域，具體是涉及單克隆抗體的制備及其應用于免疫熒光方面。此種抗體可與大鼠Mas相關性G蛋白耦聯受體D(MrgD)結合，且具有良好的特異性，結合免疫熒光法，可快速檢測心臟病理生理條件下MrgD表達水平的變化，對病理的發生發展過程提供可靠的依據。

技術領域

本發明涉及MrgD免疫抗原片段、MrgD抗體及其制備方法和應用，屬于生物醫藥領域。

背景技術

高血壓疾病逐年增加，其危害主要為靶器官損傷，包括心血管重構、腦卒中、腎衰、眼部疾病等。高血壓的調控主要有激素調節和神經調控，前者主要為腎素-血管緊張素系統(RAS)，后者為交感副交感調控。研究發現，Mas相關性G蛋白耦聯受體D(MrgD)是腎素-血管緊張素系統調控的主要受體，在腎素-血管緊張素系統調控中起到重要作用。但MrgD的體內分布以及作用機制尚未明確，因此，如果能發明一種方法，可以快速測定MrgD在體內的分布情況，對于高血壓的調控有著重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種大鼠Mas相關性G蛋白耦聯受體D(MrgD)免疫抗原片段，可用于制作MrgD抗體，MrgD抗體可用于MrgD免疫熒光示蹤。

本發明采取的技術方案為：一種MrgD免疫抗原片段，其序列為：Ser Ser Pro AlaPro Gly Leu Thr Ile Ser Pro Thr Met Asp Cys。

本發明還公開了一種MrgD抗體，為上述的MrgD免疫片段注入動物體內后產生的抗體。

優選的，所述抗體為兔抗MrgD抗體。

本發明還公開了一種MrgD抗體的制備方法，其步驟包括：

(1)合成多肽片段Ser Ser Pro Ala Pro Gly Leu Thr Ile Ser Pro Thr MetAsp Cys；

(2)將步驟(1)合成的多肽片段注入動物體內進行免疫，

(3)取免疫后的動物脾臟，制成脾細胞，將脾細胞與骨髓瘤細胞融合后進行培養；

(4)取融合培養細胞，用包被MrgD蛋白的間接ELISA法篩選出滴度最高且為單克隆的細胞株進行擴大培養；

(5)將擴大培養的雜交雜交瘤細胞注入同種動物體內，收集腹水，離心取上清液；

(6)腹水上清液通過蛋白G微球柱,洗脫純化后獲得MrgD抗體。

本發明還公開了MrgD抗體在免疫熒光法檢測MrgD體內分布狀況中的應用。

優選的，其步驟包括：

(1)提取大鼠原代心肌細胞，在培養基中進行培養；

(2)棄去培養基，對心肌細胞進行清洗、固定、封閉處理后，加入上述的MrgD抗體過夜；

(3)PBS清洗后，加入熒光二抗cy3孵育，洗脫熒光二抗，加入抗熒光淬滅劑后封片拍照。

本發明提供了MrgD的特異性免疫抗原片段，將該片段注入動物體內，可產生MrgD抗體，MrgD抗體可與MrgD蛋白結合，具有良好的特異性，結合免疫熒光法，可快速檢測心臟病理下MrgD表達水平的變化，為高血壓病理的發生發展提供理論依據。

附圖說明

圖1：實施例2中正常的大鼠心肌細胞中MrgD分布示意圖；

圖2：實施例3中血管緊張素II誘導心肌肥大的大鼠心肌細胞中MrgD分布示意圖。

具體實施方式