[發(fā)明專利]應(yīng)用于微載體的內(nèi)毒素含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011258960.X
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112462076B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄢曉君;劉偉;侯堃;陶洪臣;孫寶明
• 申請（專利權(quán)）人: 天津華龕生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N33/579;G01N1/28
• 代理公司: 天津市君硯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12239
• 代理人: 張東浩

1.一種應(yīng)用于微載體的內(nèi)毒素含量的檢測方法，其特征在于，包括下述步驟：

1）使用裂解液將微載體進行裂解，使所有微載體完全溶解后取上清液作為待測樣品，所述裂解液為樣本釋放劑；

所述樣本釋放劑為凍干粉、金屬鹽以及葡萄糖的混合物，所述凍干粉為膠原酶I；所述金屬鹽為氯化鉀、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉的混合物；各組分的質(zhì)量比例為：膠原酶I 0.5份；氯化鉀0.2份，氯化鈉4份，磷酸氫二鈉0.02份，磷酸二氫鈉0.03份，碳酸氫鈉0.175份，葡萄糖0.5份，乙二胺四乙酸二鈉0.036份；

使用前對所述樣本釋放劑進行預(yù)處理：將樣本釋放劑配制成1mg/mL，然后將配制好的樣本釋放劑使用無內(nèi)毒素純水稀釋50-200倍制成裂解液；

2）內(nèi)毒素檢測：對陽性對照品、陰性對照品、步驟1）的待測樣品、以及供試品陽性對照品進行檢測；包括下述步驟：

2.1）取多管鱟試劑，分別加入內(nèi)毒素檢查用水，振搖使鱟試劑完全溶解；

2.2）分別取陽性對照品、陰性對照品、步驟1）的待測樣品、供試品陽性對照品置于步驟2.1）的不同管中的鱟試劑中；

2.3）將步驟2.2）的處理好的鱟試劑分別放入水浴鍋中保溫，觀察結(jié)果，發(fā)生渾濁記為陽性，未發(fā)生渾濁記為陰性；

2.4）陰性對照品和待測樣品不得呈陽性，陽性對照品和供試品陽性對照品不得呈陰性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于微載體的內(nèi)毒素含量的檢測方法，其特征在于，對樣本釋放劑進行預(yù)處理時，將配制好的1mg/mL樣本釋放劑使用無內(nèi)毒素純水稀釋100倍制成裂解液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于微載體的內(nèi)毒素含量的檢測方法，其特征在于，步驟1）的具體步驟為：取微載體置于容器中，加入裂解液，混合均勻，置于恒溫箱內(nèi)進行孵育，恒溫箱溫度為室溫至40℃，孵育時間為12-48小時。