[發明專利]用于治療COVID-19感染的抗S1蛋白受體結合域多克隆抗體

有效

• 申請號: 202011255850.8
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112341540B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 魏卿;肖海蓉;劉慶喜
• 申請（專利權）人: 英科博雅基因科技（天津）有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12N15/50;C12N15/70;B01D15/38;A61K39/395;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.快速分離獲取用以制備抗S1蛋白受體結合域的多克隆抗體的血漿的方法，該方法是將取自人的外周血使用封閉式多細胞組分自動化分離系統分離成三個組分層：紅細胞層、細胞濃縮層、血漿層，接著將得到血漿進行病毒滅活，任選地將該血漿在-20℃以下凍存，得到可用于制備抗S1蛋白受體結合域的多克隆抗體的血漿；該方法包括如下步驟：

(1)、通過靜脈穿刺法采集的SARS-CoV-2自然感染者并通過血清抗體滴度/血清中和抗體滴度確認后的康復者的外周血250mL，，置血液采集袋內，該采集袋內裝有抗凝劑，將血液采集袋置于水平搖床上充分混勻15min；

(2)、使用封閉式多細胞組分自動化分離系統，將一次性使用分離杯的塑料針頭插入到血液采集袋上的無菌接口內，將采血袋掛起，使其中的40mL血液自然流入分離杯內的中央艙室；在加入血液前所述中央艙室內預先添加有0.4mL分離助劑；用無菌接合儀焊接管路將血液采集袋與一次性分離杯分離，再使該一次性分離杯置于水平搖床上充分混勻10min；所述分離助劑是包含油酸鈉和硫酸鎂的滅菌水溶液，其中油酸鈉濃度為5%，硫酸鎂以鎂離子計為0.25mol/L；所述封閉式多細胞組分自動化分離系統是ThermoGenesis Corp.生產的PXP? System；

(3)、將一次性分離杯配平后放置于可編程的離心機進行離心操作，并按照如下程序設定離心機的參數：

在離心的初始高速部分即2000RCF期間，外周血樣本中的細胞通過密度分層在一次性使用分離杯中分為三個組分：紅細胞層、細胞濃縮層、血漿層；

將速度降低至50RCF，并且在此第一次低速離心期間，大部分紅細胞被引導至紅細胞回收艙；

短暫增加速度至500RCF，以進一步將處理室中的細胞分層；

再次降低至50RCF，進一步除去紅細胞；

在采集血漿之前，相對離心力短暫增加至250RCF，在此期間，細胞濃縮層和血漿進一步分層；

再次降低至50RCF，細胞濃縮層通過輸送管轉移至回收艙室，使大部分血漿保留在中央艙室中；

(4)、離心機減速并停止旋轉，在一次性分離杯中分別單獨采集紅細胞、細胞濃縮層、血漿；

(5)、利用無菌接管機連接一次性分離杯上中央艙室的管路和轉移袋的管路，將中央艙室中的分離后的血漿轉移至轉移袋內；用無菌接合儀焊接管路后，將分離后的血漿用亞甲藍光化學法病毒滅活，然后在6h內快速凍結至-20℃以下，保存，得到血漿，其備用于制備抗S1蛋白受體結合域的多克隆抗體的制劑。

2.根據權利要求1的方法，其所獲得的血漿丙氨酸氨基轉移酶活性低于40U/L。

3.根據權利要求1的方法，其所獲得的血漿之HbsAg、梅毒、HIV-I、HIV-II抗體、HCV抗體用經批準的檢測試劑盒檢測后為陰性。

4.根據權利要求1的方法，其所獲得的血漿中，蛋白質含量高于50g/L。

5.根據權利要求1的方法，所述采集袋內的抗凝劑為枸櫞酸鈉。

6.根據權利要求1的方法，所述分離助劑是照如下方法配制的：將規定量的油酸鈉和硫酸鎂溶解于注射用水中，用0.45μm微孔濾膜過濾，封裝于玻璃瓶中，121°C熱壓滅菌15min，即得。